野生塔里木马鹿粪便DNA提取方法和性别鉴定研究

【摘要】： 塔里木马鹿(cerus elaphus yarkandensis)属于国家Ⅱ级保护动物,鹿科大型兽类,是众多马鹿亚种中分布于荒漠地区的特殊亚种之一,在新疆的生物多样性中占有重要的地位。其分布范围比较狭小,仅分布于塔里木河中下游和车尔臣河下游地区,其种群数目由于环境的不断恶化而不断减小,生存状况令人堪忧。 以粪便为材料提取DNA进行野生动物的研究,近年来已经引起了国内外越来越多的关注。但是由于粪便样本有其自身的特殊性,例如含杂质过多,容易降解、DNA量少、个体间存在差异等等,因此常常会导致DNA提取的失败。 本试验用非损伤性取样方法,以塔里木马鹿粪便作为研究对象,结合国内外常用的三种粪便DNA提取方法的特点,建立了一种适合塔里木马鹿等大型植食性哺乳动物的粪便DNA提取方法,讨论了影响粪便提取的一些相关因素;并利用SRY引物和一个微卫星引物对提出的粪便DNA进行PCR扩增,以检验DNA的质量和初步鉴定塔里木马鹿野外种群的性别比例。 本试验主要得出以下结果:1.以塔里木马鹿粪便为样本,粪便DNA的提取最佳流程如下:采用干燥冷冻保存法保存样本、每个样本做多个平行管、用丙酮或PBS对粪便进行预处理、采用手术刀刮取粪便外部表层、CTAB裂解细胞、SiO2特异吸附DNA、最后合并多管产物并用纯化试剂盒进行纯化,以得到较高质量的DNA;2.从50份粪便样本中,成功扩增了45份样本,其中16份为雄性,29份为雌性。雄雌比率为0.55:1。