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绵羊卵母细胞体外成熟和孤雌激活的研究

王旭光  
【摘要】: 本文利用屠宰绵羊卵巢,对新疆绵羊卵母细胞的体外成熟、孤雌激活以及孤雌激活胚胎的体外培养进行了系统的研究。 对比了不同季节新疆绵羊卵母细胞在不同FSH、LH浓度下体外成熟的效果,同时对绵羊卵巢的运输温度、绵羊卵母细胞体外成熟的时间等做了对比实验;并对添加人HGF对绵羊卵母细胞体外成熟效果的影响进行了对比。结果表明:新疆绵羊卵母细胞在不同的季节中,体外成熟所需的FSH、LH浓度不同,夏秋乏情季节适宜于体外成熟的激素浓度为FSH 12.9ug/ml,LH0.86IU/ml;秋季发情季节适宜于体外成熟的激素浓度为FSH 8.6ug/ml,LH0.57IU/ml;春季乏情季节适宜于体外成熟的激素浓度为FSH 8.6ug/ml,LH0.86IU/ml。而绵羊卵母细胞体外成熟的培养时间以24~26h为宜。适宜的绵羊卵巢运输温度是20~35℃。成熟培养液中添加人HGF对绵羊卵母细胞体外成熟有抑制作用。 通过使用不同的EH和电激活方案,我们设计了一系列实验以优化绵羊体外成熟卵母细胞孤雌激活效果。结果表明:EH激活体外成熟绵羊卵母细胞的最适激活参数为7%、7min;EH与CHX联合激活效果要好于各自单独激活(差异极显著)。电激活体外成熟绵羊卵母细胞的最适激活参数为1.2Kv/cm、脉冲3次。E+A23187+CHX是最适绵羊卵母细胞激活方案,卵裂率达到69.8%,囊胚率达到30%。 本文还对比了不同蛋白质添加剂对绵羊孤雌激活卵母细胞第一次卵裂的影响;对比了添加不同浓度NEAA对绵羊孤雌激活胚胎发育的影响以及不同共培养系统对孤雌激活胚胎发育的影响。结果表明:BSA与低浓度FBS协同作用可以促进绵羊孤雌激活胚胎的第一次卵裂。添加3.0%NEAA能显著提高绵羊孤雌激活胚胎桑囊胚的发育率。类序贯培养系统(TCM199+KL)+(mSOF+SLG)共培养是绵羊孤雌激活胚胎培养的最适培养系统。


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