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猪囊尾蚴小热休克蛋白的免疫原性分析

郭爱疆  
【摘要】:利用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)从猪囊尾蚴总RNA中扩增出小热休克蛋白(small heat shock protein,sHSP)基因,测序证实所克隆的基因序列与国外报道的猪囊尾蚴sHSP基因序列同源性为99.4%。将该基因克隆至原核表达载体pGEX-4T-1,在大肠杆菌BL21中以GST融合蛋白的形式表达,SDS-PAGE分析证明,表达产物为64ku的融合蛋白,呈可溶性表达,经凝胶扫描、Gel-Pro Analyzer分析,表达量约占菌体可溶性蛋白的30%。免疫学分析(Western blotting、ELISA)结果表明,sHSP能与猪囊尾蚴血清反应。将表达产物电泳后切胶回收免疫小鼠,进行Western blotting和间接ELISA检测,其抗血清能与猪囊虫粗抗原及纯化的sHSP重组融合蛋白产物发生免疫学反应,这为探索新的免疫重组抗原和研制多分子疫苗提供理论依据和实验材料。利用生物信息学技术蛋白质专家分析系统对sHSP基因翻译后加工修饰预测,发现猪囊尾蚴sHSP有10个O-连糖基化位点。糖基化对蛋白质的分子量有一定的影响,也对免疫活性有影响,且有糖基化程度越高影响越大的趋势[1]。同时预测其还有18个磷酸化位点,sHSP转录诱导活性的获得可能依赖于其磷酸化,以往研究证实,sHSP的磷酸化位点通常位于几个较为保守区域内的丝氨酸和苏氨酸残基上,热休克的程度越高,它们就越易被磷酸化,从而导致较高水平的转录诱导,并能维持较长的时间[2]。这说明糖基化、磷酸化作用在sHSP实现其生物学功能过程中起着重要的作用。 WP=9


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