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牛体外受精的研究

翁凡  
【摘要】:为了提高牛体外受精的效率,本研究利用屠宰黑白花牛卵巢获取卵泡卵母细胞,对牛体外受精的三个主要技术环节—卵母细胞的体外成熟,卵母细胞的体外受精,受精卵的体外培养进行了系统研究。结果如下: 1.依照卵丘细胞的完整程度分别对牛卵母细胞进行体外培养。结果发现,裸卵的受精率(卵裂率)和桑囊胚率均明显低于有卵丘细胞的卵母细胞(P0.01),但与卵丘细胞共培养后,其受精卵有少数能发育到桑椹胚阶段。此外还发现,有卵丘细胞的卵母细胞,卵丘细胞越完整,其桑囊胚率越高(P0.05)。这说明,卵丘细胞对牛卵母细胞的体外成熟十分重要。 2.添加不同浓度的牛卵泡液(bovine follicular fluid,bFF)代替胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)培养牛卵母细胞。结果显示,添加10%bFF可取得与10%FBS相当的效果(P0.05);其它浓度则显著降低了体外成熟率(P0.01)。这说明,添加适量的bFF对牛卵母细胞的体外成熟率不产生明显影响。 3.添加不同浓度的山羊卵泡液(goat follicular fluid,gFF)代替FBS培养牛卵母细胞,结果显示,10%gFF组在体外成熟率上与对照组(10%FBS)无明显差异(P0.05),而其它组的成熟率则显著下降(P0.01)。这表明,gFF对牛卵母细胞的作用没有种的特异性,添加适量的gFF对牛卵母细胞的体外成熟率无明显影响。 4.牛卵母细胞受精前,分别对其周围的卵丘细胞及胞外基质(cumulus oophorus and matrix,COM)作不同程度的剥离处理。从受精后的结果来看,各处理组在受精率(卵裂率)上无显著差异(P0.05),但COM全部剥离组在桑囊胚发育率上明显低于含COM组(P0.01)。由此看来,COM对牛卵母细胞的受精影响不大,但对受精后的胚胎发育却十分重要。 5.将成熟培养后的牛卵母细胞分别置于不同温度下受精。结果显示,39℃下的受精率(卵裂率)、囊胚率和D7囊胚率均高于其它温度。这表明,受精温度对牛卵母细胞的受精率、受精后的胚胎发育率和胚胎的发育速度都有明显影响,39℃下受精效果较好。 6.分别于受精后的不同时间剥离卵母细胞周围的卵丘细胞,转入颗粒细胞单层继续培养。结果显示,24h、36h和48h组桑囊胚率明显高于其它各组(P0.01),其中36h组的桑囊胚率略高于24和36h组,但无统计学差异(P0.05)。这说明,卵丘细胞的剥离时间对胚胎的体外发育有明显影响,受精后的24~48h是一个比较合适的卵丘细胞剥离时间。


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