收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

免培奶牛瘤胃混合微生物基因组资源的初步研究分析

杨瑞红  
【摘要】:在自然界生物圈里微生物分布最广、生物量最大(约占总生物量的60%)、物种及代谢多样性(约为3.8 亿年进化的产物)最丰富,且其中蕴含着极丰富的基因资源,因此吸引了越来越多的学者对不同环境微生物的研究和开发。例如对湖泊、海洋、土壤等环境已经做了很多方面的研究。 环境瘤胃是由大量的古菌、细菌、真菌和原生动物组成的复杂的独特的微生物生态系统,不仅含有物种丰富的基因资源,还在反刍动物营养代谢中有独特的功能。瘤胃微生物在秸秆纤维降解过程和营养组分转化摄取过程中起到十分重要的作用,它能将这些秸杆废弃物转变为反刍动物可吸收的形式能量、蛋白质、必需氨基酸和维生素等营养物质,所以有很多关于瘤胃微生物的研究。尽管关于瘤胃微生物研究已有几十年历史,但由于瘤胃环境的特殊和培养技术的限制,使得人们没有认识到其中的绝大多数微生物。而免培养技术的兴起和应用,为研究特殊环境微生物多样性提供了有效的手段,人们已经可以不依赖微生物菌种分离培养而直接从分子水平上研究微生物资源。 本研究采用免培技术研究免培环境瘤胃微生物。首先,摸索从瘤胃液样品中抽提、分离和纯化混合瘤胃微生物基因组DNA 的方法。瘤胃微生物混合DNA 的提取率为每毫升瘤胃样品0.1~0.3μg。其次,以粗提DNA 直接为模板,用细菌16s rDNA 通用引物进行PCR,回收PCR 产物构建16s rDNA 文库,通过测序建立系统发育树,进行瘤胃微生物的初步系统发育关系分析,发现一些新序列并向Genbank 提交得到序列号。再次,采用试剂盒纯化粗提混合基因组DNA,用限制性内切酶EcoRⅠ部分酶切经纯化后的基因组DNA 构建以pSK(+)(pBluescript ⅡSK(+))为载体的混合基因组DNA 质粒文库。由试验鉴定文库得到1.9×105个转化子, 外源插入DNA 片段的平均大小为4.2kb,库容达到7.98×102Mb。建库效率为每毫升环境样品瘤胃获得1000 个左右的含3~10kb 外源随机插入片段的克隆。通过DNA 序列测定和同源性比较,对从文库中随机调取的750 个转化子的序列进行网上比对分析,发现可能编码多种酶和蛋白的新基因。如过氧化氢酶、猛超氧化歧化酶、ATP 酶、dUTPase、GTPase、几丁质酶、木聚糖酶、β-半乳糖酶、β-葡萄糖甘酶、溶血素、假设维生素B1 生物合成蛋白、氮调节蛋白、抑制四环素蛋白、运输镁蛋白、钴蛋白、铁蛋白等。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 赵智力;王思珍;;反刍动物瘤胃微生物对饲料毒物的作用[J];中国动物保健;2008年06期
2 艾丹;郭春华;尹永志;严锦绣;于婷婷;曹龙凯;;16SrRNA指纹分析技术在瘤胃微生物研究中的应用[J];饲料研究;2011年02期
3 荆元强;宋恩亮;杨维仁;刘桂芬;谭秀文;万发春;;牛瘤胃微生物定量测定方法研究进展[J];动物医学进展;2011年07期
4 陈庆今,刘焕彬,胡勇有;瘤胃微生物对纤维素降解机理[J];微生物学杂志;2002年02期
5 王瑞龙;吴敏;;瘤胃微生物对蛋白质降解利用的影响[J];江西畜牧兽医杂志;2006年03期
6 李旦;杨舒黎;罗淑萍;王加启;;瘤胃微生物总DNA提取方法的比较[J];中国农学通报;2006年09期
7 杨舒黎;王加启;卜登攀;;瘤胃微生物定量方法研究进展[J];中国畜牧兽医;2007年03期
8 朱雅新;东秀珠;黄力;董志扬;;瘤胃元基因组BAC文库研究[J];中国农业科技导报;2007年05期
9 张迪;刘大程;卢德勋;高明;;瘤胃内3种主要纤维分解菌的研究进展[J];中国畜牧兽医;2008年01期
10 张洁;陈旭伟;徐爱秋;王洪荣;;瘤胃微生物对饲料碳水化合物的消化代谢[J];中国奶牛;2008年02期
11 于连林;靳利娥;鲍卫仁;;利用基本培养基初步筛选牛瘤胃中纤维素降解菌[J];中国微生态学杂志;2009年02期
12 祁茹;林英庭;;瘤胃微生物的传统定量方法在反刍动物中的应用[J];中国奶牛;2011年10期
13 朱雅新;王加启;马润林;黄力;董志扬;毛爱军;罗淑萍;;荷斯坦奶牛瘤胃微生物元基因组BAC文库的构建与分析[J];微生物学报;2007年02期
14 郑国展;利用瘤胃微生物酶类增进畜牧业的生产能力[J];动物营养学报;1999年S1期
15 赵玉华;杨瑞红;王加启;;瘤胃微生物甲烷生成的机理与调控[J];微生物学杂志;2005年05期
16 成玉梅;邓卫东;毛华明;;传统技术与现代分子生物学技术在瘤胃微生物多样性方面的研究进展[J];动物医学进展;2006年S1期
17 张慧玲;霍小凯;陈勇;国卫杰;;绵羊瘤胃微生物CMCase酶促反应最适条件研究[J];饲料工业;2007年03期
18 吕莉华;侯先志;王海荣;王贞贞;高爱武;;绵羊瘤胃微生物基因组DNA提取方法的探讨[J];畜牧与兽医;2008年04期
19 安娜;李吕木;程建波;;微生物宏基因组学及其在瘤胃微生物研究中的应用[J];安徽农业科学;2010年07期
20 刘薇;方国庆;刘立成;王志博;王燕;张永根;;奶牛瘤胃微生物DNA提取法的研究与优化[J];中国畜牧杂志;2011年13期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 周勃;冯仰廉;;不同能量水平日粮对肉牛瘤胃微生物氨基酸组成的影响[A];反刍动物营养需要及饲料营养价值评定与应用[C];2011年
2 江红;Amanda L.Jones;Mike Goodfellow;;智利南部海域海洋沉积物放线菌多样性分析[A];2008年中国微生物学会学术年会论文摘要集[C];2008年
3 孙伟丽;李光玉;刘晗璐;鲍坤;钟伟;王欣;;我国茸鹿瘤胃微生物研究进展及发展趋势[A];2010中国鹿业进展[C];2010年
4 李成渤;王建民;;聚合多样性[A];中国畜牧兽医学会养猪学分会第五次全国会员代表大会暨养猪业创新发展论坛论文集[C];2010年
5 莫放;张晓明;李胜利;杨雅芳;;瘤胃微生物蛋白质合成测定方法的研究[A];反刍动物营养需要及饲料营养价值评定与应用[C];2011年
6 周亚文;刘建新;;湖羊瘤胃细菌多样性的初步分析[A];中国畜牧兽医学会动物营养学分会第十次学术研讨会论文集[C];2008年
7 张建楼;王晓丹;钟秀会;;中药对反刍动物瘤胃微生物的影响[A];京津冀畜牧兽医科技创新交流会暨新思想、新观点、新方法论坛论文集[C];2008年
8 陈杰;;反刍动物机体与瘤胃微生物之间信息传递的研究[A];动物生理生化学分会第八次学术会议暨全国反刍动物营养生理生化第三次学术研讨会论文摘要汇编[C];2004年
9 奚晓琦;王加启;卜登攀;栾广春;于萍;刘开朗;魏宏阳;周凌云;;DGGE技术及其在瘤胃微生物多样性研究中的应用[A];中国奶业协会年会论文集2008(上册)[C];2008年
10 李树聪;王加启;王吉峰;姚美蓉;;日粮精粗比对泌乳奶牛瘤胃微生物及小肠可吸收氨基酸组成的影响[A];中国畜牧兽医学会2004学术年会暨第五届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会论文集(上册)[C];2004年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 高巍;瘤胃微生物对植物细胞壁降解的相对贡献及其附着与降解的关系研究[D];中国农业大学;2004年
2 赵玉华;瘤胃微生物Real Time PCR定量方法的建立及其应用[D];中国农业科学院;2005年
3 郭军;马铃薯晚疫病菌遗传多样性及其小种特异无毒基因遗传定位和转录表达谱研究[D];中国农业科学院;2005年
4 牟洪香;木本能源植物文冠果(Xanthoceras sorbifolia Bunge)的调查与研究[D];中国林业科学研究院;2006年
5 毛胜勇;延胡索酸及其钠盐对瘤胃发酵特性及瘤胃细菌菌群的影响[D];南京农业大学;2006年
6 岳正波;水生植物的瘤胃微生物转化[D];中国科学技术大学;2008年
7 邓露芳;日粮添加纳豆枯草芽孢杆菌对奶牛生产性能、瘤胃发酵及功能微生物的影响[D];中国农业科学院;2009年
8 侯哲生;玉米秸皮粘胶纤维浆粕仿生预处理工艺和蠕动发酵罐研究[D];吉林大学;2008年
9 王子峰;海藻表面附着弧菌多样性分析及方法研究[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2006年
10 禹娜;现生介形类动物系统发生及太湖介形类动物群落结构研究[D];华东师范大学;2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 杨瑞红;免培奶牛瘤胃混合微生物基因组资源的初步研究分析[D];新疆农业大学;2005年
2 张玲;双峰驼瘤胃细菌多样性及宏基因组文库构建与初步筛选[D];新疆农业大学;2010年
3 张辉;酚酸对瘤胃微生物发酵作物秸秆细胞壁的影响[D];中国农业大学;2005年
4 孙宏选;不同来源的蛋白质和非结构性碳水化合物对泌乳奶牛瘤胃微生物酶活性的影响[D];中国农业科学院;2006年
5 李秉一;太白山不同海拔缓步动物群落组成的比较[D];陕西师范大学;2007年
6 蔡荔萱;福建青冈林群落特征及植物多样性的研究[D];南京林业大学;2007年
7 刁欢;瘤胃微生物氨基酸代谢及甲硫氨酸降解菌的研究[D];安徽农业大学;2007年
8 赵淑文;阿拉善荒漠区种子植物区系研究[D];内蒙古农业大学;2008年
9 郑颖;瘤胃微生物与三种蛋白质饲料降解规律关系的研究[D];首都师范大学;2000年
10 王茂荣;不同水平的铜、铁、碘、钼对RSI-Ⅱ人工瘤胃微生物发酵的影响[D];山西农业大学;2001年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 ;中药对反刍动物瘤胃微生物的影响[N];中国畜牧兽医报;2009年
2 姚春德;牛喂尿素四不宜[N];山东科技报;2002年
3 叶群青;中国农科院“瘤胃微生物脲酶抑制剂的合成与应用”获国家科技进步二等奖[N];中国高新技术产业导报;2000年
4 边冀;畜牧专家王加启[N];农民日报;2002年
5 ;肉牛饲料的利用率[N];中国畜牧兽医报;2009年
6 郑延平;冬季喂尿素 牛儿长得壮[N];湖南科技报;2003年
7 ;发酵苹果渣 喂牛效果好[N];吉林农村报;2009年
8 龚桂菊;畜牧营养专家 王加启[N];农民日报;2001年
9 张长兴;用鸡粪加工牛羊饲料[N];山西科技报;2001年
10 ;乙酰氧肟酸[N];中国畜牧兽医报;2009年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978