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荷斯坦牛中性粒细胞β-防御素基因克隆及其原核表达质粒的构建

刘双龙  
【摘要】: 为研究牛乳腺防御素功能活性,研发牛防御素生物制剂来防治奶牛乳腺炎。根据已发表的牛β-防御素基因序列设计一对引物,从具有临床乳房炎症状的荷斯坦奶牛血液中性粒细胞中用试剂盒提取总RNA。经过反转录PCR(RT-PCR)扩增出牛β-防御素cDNA片段,并克隆到pMD18-T载体。测序结果表明,扩增出的片段含有189bp核苷酸,与已报道的牛β-防御素cDNA序列同源性达96.3%。推导该序列编码63个氨基酸,并含有β-防御素的特征性分子结构即在特定位置上有6个保守的半胱氨酸残基(C)。可以确定该cDNA为β-防御素家族的成员BNBD-7。该基因插入到原核表达载体pQE-30,pET-32a中,构建原核表达质粒,为β-防御素的的表达及功能、活性的研究奠定了一定的基础。


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