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棉花体细胞胚胎发生能力比较及IAP-P35(The anti-apoptotic baculovirus)基因遗传转化初步研究

严勇亮  
【摘要】: 本研究通过诱导陆地棉下胚轴的体细胞胚胎发生建立了陆地棉的植株再生体系;并以新陆中15号胚性愈伤组织为受体,通过农杆菌介导法进行了IAP-P35基因的遗传转化,获得了转基因再生植株。为今后新疆陆地棉分子改良奠定了基础。本研究取得的主要结果如下: 1.陆地棉愈伤诱导最适培养基为:MSB添加0.1mg/LKT及1.0mg/LIBA,愈伤组织诱导率达90%以上。质地疏松愈伤组织分化的最适条件为,MSB培养基中KNO3加倍并添加0.1mg/LIBA可使60%以上的愈伤组织分化。 2.体细胞胚形态建成的最适条件为:MSB中KNO3加倍去除NH4NO3并添加2.0g/L凝固剂gelrite、0.5g/L天冬酰胺、1.0g/L谷氨酰胺及0.05mg/L IBA,使供试的7个陆地棉品种中有6个品种实现体细胞分化和植株再生。培养周期为6-7个月。比较黄河流域和新疆棉区棉花品种体细胞发生和植株再生能力发现,黄河流域的2个品种都能再生(中棉所35和中棉所44)、新疆棉区的4个品种再生了3个(新陆中15号、新陆早7号、系9),表明黄河流域和新疆棉区品种的胚胎发生和植株再生潜力没有明显差别,但两大棉区品种体细胞胚胎发生和植株再生时间有明显差异,新疆棉区的品种分化时间比黄河流域的品种晚30天左右。 3.农杆菌介导陆地棉新陆中15号的胚性愈伤组织,获得转IAP-P35基因的转基因植株。转化条件为:新陆中15号胚性愈伤组织预处理10d后,于OD值为0.5的菌液中浸泡10min后共培养24h。处理完毕后,将胚性愈伤组织转入添加50mg/L潮霉素B及200mg/L头孢霉素的培养基中诱导转基因体细胞胚胎分化,可获得15%左右的转基因体细胞胚胎,其中5%可获得正常再生植株。通过PCR检测,初步证明IAP-P35基因已整合到部分再生的棉花基因组中。


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