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不同来源产单核细胞李斯特菌株对不同环境因子的抗性研究

古丽孜帕·夏热浦汗  
【摘要】:产单核细胞李斯特菌(Listeriaes monocytogenes,LM)是重要的人畜共患病原菌及毒力最强的食源性病原菌,LM的致病性与毒力基因密切相关,缺失毒力基因可以导致其致病性的消失或下降。而不同环境因子作用于LM后是否影响其毒力基因表达,从而丧失其已有的毒力,不同来源分离株LM对不同环境因子的耐受性是否相同等仍不清楚。本研究以食源性LM标准株、绵羊脑炎LM分离株(LM90)及青贮饲草分离株LM(LM19)作为试验菌株,分别采用不同温度、PH值、氯化钠浓度、紫外线进行作用,通过检测LM的生长状态、毒力因子、主要毒力基因的表达情况,以确定不同来源LM分离株对不同环境因子的抗性,为进一步探讨LM的保菌机制、维持致病力机制及食源性LM传播控制提供参考。主要研究内容和结果如下:1、不同来源LM对不同理化因子的抗性采用不同温度、p H、氯化钠浓度、紫外线作用不同来源LM,通过活菌计数和吸光度检测观察细菌生长状况。结果62℃30分钟和72℃30分钟三株LM均生长,其中食源性LM对热抗性最强、LM19最弱,100℃时三株LM均不生长,提示巴氏消毒方法对处理污染LM的食品时存在安全隐患;低温环境4℃/10d、4℃/20d、-20℃/10d和-20℃/20d下LM仍存活,4℃较-20℃更利于LM生长,其中LM19对低温的抗性最强,LM90最弱,提示低温冷藏和冷冻对受LM污染的食品不影响LM的生存活性;不同PH及盐浓度生长试验显示Ph4-10时三株LM均生长良好,ph2-3活菌数很少,其中LM19抗酸性最强,食源性LM最弱,说明食品保存应在保证不影响食品品质的前提下尽可能选酸性条件保存,制备青贮时保持在p H4以下,可控制青贮中LM的生长;在1-7%浓度盐环境中三株LM生长良好,随着盐浓度增大,存活率逐渐下降,其中以LM90的抗盐性最强,在10%以上盐浓度下三株LM趋于不生长,从而间接说明腌制食品受LM污染的风险较小;在紫外线照射时间超过90min时才能完全杀灭LM,其中以LM19的抗性最强。因此,紫外线用于微生物实验超净工作台消毒时,照射时间最好达到90min以上。2、不同来源LM受不同理化因子作用后其毒力因子变化三株LM受温度为-20℃-72℃处理后均出现β溶血现象;pH2-10的环境下,三株LM均出现β溶血圈;在1%-18%盐浓度时三株LM均出现明显β溶血现象;不同时间紫外线照射后,食源性LM和LM90在0-90min均出现溶血现象,LM19在0-60min出现了溶血圈。磷脂酶试验显示,三株LM在-20℃-72℃温度下、p H2-10及1%-18%盐浓度时三株LM周边均出现乳白色晕圈现象,显酶活性阳性反应,且圈的大小无明显差异;紫外线照射显示食源性LM和LM90在0-90min时磷脂酶阳性,LM19在0-60min均为阳性。3、不同来源LM受不同理化因子作用后其毒力基因的变化三株LM除在100℃不生长外,其余-20℃-72℃生长的细菌均通过PCR扩增出hly毒力基因目的片段(743bp)和prf A毒力基因目的片段(715bp);在p H2-10生长的细菌均通过PCR扩增出hly和prf A毒力基因目的片段;盐浓度在1%-18%下生长的细菌均通过PCR扩增出hly和prf A毒力基因目的片段,紫外线照射后均通过PCR检测到hly和prf A毒力基因目的片段。上述研究结果表明,不同来源LM在不同理化因子作用后,其生长存活性状与其主要毒力因子溶血素和磷脂酶变化及毒力基因Hly和毒力调控因子Prf A的表达呈一致性,环境因子只能影响其生存活性,不影响其毒力;从而推出环境因子能影响其生存活性,但对毒力基因Hly和毒力调控因子Prf A影响不大;不同来源LM对不同理化因子的抗性差异不明显。研究结果进一步论证了LM对多种理化因子有很强的抗性及容易造成食品污染的风险。


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