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大鼠精原细胞分离纯化及双酚A对其活力和结构的影响

王琳  
【摘要】:目的 探讨大鼠精原细胞的分离纯化及双酚A对精原细胞活力和结构的影响。方法 三种酶两步消化法制备10dWister大鼠睾丸的单细胞悬液;Percoll不连续密度梯度分离精原细胞;用贴壁速度的差异纯化精原细胞。光电镜观察精原细胞的形态结构特征;应用c-kit免疫细胞化学鉴定精原细胞。苔盼蓝计数法探讨不同剂量组双酚A(1×10~(-4)mol/L、1×10~(-5)mol/L、1×10~(-6)mol/L、1×10~(-7)mol/L)对离体培养精原细胞活力的影响;吉姆莎染色观察不同剂量组双酚A对离体培养精原细胞形态结构的改变。结果 精原细胞主要分布于28%~36%(Ⅱ带)间的Percoll梯度;分离纯化的精原细胞形态结构与组织切片上精原细胞的形态结构一致,其纯度达55.68%;c-kit在精原细胞呈阳性表达,在睾丸其他细胞呈弱阳性或阴性表达。双酚A可降低离体培养精原细胞活力,增加精原细胞核固缩数量,改变精原细胞的形态结构。结论 利用三种酶两步消化法、Percoll不连续密度梯度及体外培养贴壁速度的差异分离纯化的精原细胞满足体外实验要求;精原细胞表达特异的c-kit受体。双酚A对精原细胞有直接的细胞毒性作用。


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