人类8型疱疹病毒组合抗原血清检测方法的建立及新疆地区流行病学调查

【摘要】：目的：构建人类8型疱疹病毒(HHV-8)基因ORF_(73CC)，ORF_(65)，ORF_(K8.1)重组原核表达质粒并诱导表达，获得HHV-8病毒潜伏态相关核抗原、包膜蛋白、外壳蛋白的重组融合蛋白，以这三种病毒重组融合蛋白作为检测抗原，建立人类8型疱疹病毒组合抗原酶联免疫吸附检测法(组合抗原ELISA)，对新疆地区人类8型疱疹病毒流行状况做初步的血清流行病学调查并分析感染危险因素。方法：1)软件设计引物，在引物两端添加特异性酶切位点，以pGEM-Teasy／ORF_(73CC)、pGEM-Teasy／ORF_(65)、pGEM-Teasy／K8.1质粒为模板，PCR扩增各基因序列，克隆入原核表达载体pET-41a(+)中，构建原核表达质粒pET41a-ORF_(73CC)、pET41a-ORF_(65)、pET41a-K8.1；转化E．coli DH_(5x)，经酶切、测序鉴定其插入序列的正确性，转入E．coliBL_(21)(DE3)，并诱导表达，以亲合层析柱纯化，SDS-PAGE、Western-Blot方法进行表达蛋白的分析和免疫特异性鉴定；以重组融合蛋白为抗原，分别以卡波西肉瘤患者血清和健康儿童血清作为阳性对照和阴性对照，建立人类8型疱疹病毒组合抗原酶联免疫吸附检测法(组合抗原ELISA)，采用卡波西肉瘤患者血清和来自低HHV-8感染地区的法国肝移植后皮肤肿瘤患者血清验证检测方法的灵敏性、特异性。2)对新疆医科大学第一附属医院和肿瘤医院住院的维吾尔族和汉族肿瘤患者进行了随机问卷调查、病历记录及采