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人脐血单个核细胞分离、培养方法的比较

李敏  
【摘要】: 目的:采用不同的分离、培养条件,以筛选出一种相对较好的脐血单个核细胞(mononuclear cells ,MNCs)分离、培养方法。方法:取2007-5/2008-2新疆医科大学第一附属医院产科健康产妇的脐血,比较不同分离方法所得脐血MNCs数及随后的细胞形态学变化,比较不同换液时间、不同培养基、不同浓度的胎牛血清对脐血MNCs原代培养及传代过程的影响,在原代培养第30天通过流式细胞仪检测细胞表面免疫表型。结果:3种分离方法在分离脐血MNCs数方面差异具有统计学意义(P0.01),其中以羟乙基淀粉沉淀法得到的MNCs数量最多(15.23±4.30)×106/mL,密度梯度离心法、CD133免疫磁珠组所获MNCs数分别为(3.71±1.14)×106/mL、(0.066±0.027)×106/mL。但羟乙基淀粉沉淀法所得细胞生长状态欠佳。首次第5天~7天换液、低糖DMEM、IMDM培养基有利于MNCs的生长。还不能认为30%胎牛血清与20%胎牛血清的培养基在培养脐血MNCs方面有差别。流式检测密度梯度离心法、CD133免疫磁珠组CD34阳性率分别为10.1%、0.5%。结论:羟乙基淀粉沉淀法是一种高效的脐血分离方法,但其所得细胞的生长状态欠佳,需进一步实验证实。CD133免疫磁珠法所获细胞纯度高,可根据不同要求选用相应分离法。首次第5天~7天换液、低糖DMEM、IMDM培养基是相对较好的MNCs培养条件。30%胎牛血清与20%胎牛血清的培养基在培养脐血MNCs方面尚未发现差别。


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