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鲜蒜、蒜氨酸、蒜酶定量分析方法与蒜氨酸质量标准研究

赵荣梅  
【摘要】: 目的大蒜(Allium Sativum L.)富含大量的生物活性物质和营养成分,目前,大量研究证明,大蒜具有杀菌、降血脂、抗血栓、预防中风和高血压、保护肝脏和提高机体免疫力、抗癌等功能,是近代医药研究的热点之一。目前公认大蒜的功效成分是蒜氨酸(Alliin,S-allyl-L-cysteine,2-烯丙基半胱氨酸亚砜)及经蒜酶(Alliinase,EC 4.4.1.4)催化裂解产生的大蒜辣素(Allicin,allyl-2-propenethiosulfinate,2-烯丙基硫代亚磺酸酯)和阿霍烯(ajoene)等含硫化合物。由于目前市场上的大蒜制剂含量低,疗效差,制备工艺简单,大多数大蒜制剂都是以保健品的方式销售,因此按照本课题组的设计思路,利用现代生物制药技术从大蒜中分别提取相对稳定的蒜氨酸和蒜酶,以提取出的高纯度的蒜氨酸和蒜酶作为原料,制成真正的“高效大蒜新制剂”,充分发挥疗效。蒜氨酸、蒜酶作为大蒜中最主要的原始活性成分及风味物质来源,测定其含量能够给今后的中试生产提供可靠的依据。蒜氨酸、蒜酶原料药中试生产过程中,各个检测点的样品分析也能提供中试生产的质量控制。最后对中试生产得到的原料药蒜氨酸制定了质量标准(草案)及起草说明。方法利用HPLC对鲜蒜、蒜氨酸、蒜酶进行了定量分析方法学的研究,利用研究的结果对蒜氨酸、蒜酶中试生产的检测点样品进行分析,最后制定蒜氨酸质量标准(草案)及其起草说明。结果本文分别建立了测定鲜蒜、蒜氨酸、蒜酶的分析方法。在测定鲜蒜的蒜氨酸含量中采用了外标法和内标法两种方法,并进行了的对比;考察了适合于测定50%蒜氨酸含量的分析方法;并将以上两种测定于美国药典中收载的衍生化法进行了对比;建立了HPLC法测定蒜酶活力的方法: 1.鲜蒜、蒜氨酸、蒜酶的分析方法 1.1鲜蒜的含量测定 外标法:Hypersil BDS C18柱(4.6mm×250mm,5 m),流动相为0.04 %三氟乙酸水溶液,检测波长为UV 214 nm,流速:0.5 mL·min-1。 内标法:Waters symmetry shield RP C18柱(4.6mm×250mm,5 m),流动相为水,检测波长为UV 214 nm,流速:0.5 mL·min-1。 1.2蒜氨酸(50%)的含量测定 Hypersil BDS C18柱(4.6 mm×250 mm,5 m),流动相为甲醇︰0.02 % CF3COOH水溶液(5∶95),检测波长:UV 214 nm,流速:0.5 mL·min-1。 1.3与USP方法对比 Thermo ODS柱( 4.0 mm×100 mm,3μm );流动相:0.045 mol·mL-1磷酸缓冲液:乙腈:1,4-二氧六环:四氢呋喃=69.9:25:2.9:2.2,流速:1.0 mL·min-1;检测波长:UV 337 nm。 同样测定鲜蒜和蒜氨酸(≥50%)样品,结果没有统计学差异。 1.4蒜酶活力测定 Hypersil BDS C18柱(4.6 mm×250 mm,5 m),流动相为甲醇-水(55:45),检测波长:UV 214 nm,流速:0.5 mL·min-1。 2.蒜氨酸、蒜酶中试生产过程检测点分析 本文确定了,蒜氨酸中试生产检测点的分析方法是HPLC法,条件是Hypersil BDS C18柱(4.6mm×250mm,5 m),流动相为0.04 %三氟乙酸水溶液,检测波长为UV 214 nm,流速:0.5 mL·min-1;蒜酶中试生产检测点的分析方法是紫外分光光度法,用丙酮酸法测定蒜酶的活力,用Bradford法测定蒜酶蛋白质含量,从而得出比活力。 3.蒜氨酸质量标准的研究 建立蒜氨酸(≥50%)的质量标准(草案)及起草说明。 结论本文建立了鲜蒜、蒜氨酸、蒜酶定量分析的方法,该方法简便、准确、快速、适用性好;并对蒜氨酸、蒜酶中试检测点样品进行了分析;建立蒜氨酸(≥50%)质量标准(草案)及起草说明。


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