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分子印迹聚合物及膜分离技术在异丙酚生物样品前处理中的应用研究

李魏嶙  
【摘要】: 目的:制备异丙酚分子印迹固相萃取柱和适合前处理异丙酚血样的膜分离装置,建立快速、连续、实用的异丙酚血样前处理方法,并把膜分离装置和异丙酚分子印迹固相萃取柱结合起来,对之前课题组研制的异丙酚光纤荧光检测系统系统进行改进。方法:分别用热聚合法和紫外光照射法合成异丙酚分子印迹聚合物,用相转化法和紫外光引发原位聚合法制备异丙酚分子印迹膜,考察聚合物的性能、膜的形态、聚合反应机理及印迹聚合物对血浆中异丙酚的吸附;用所得聚合物制备分子印迹固相萃取柱,优化萃取柱的活化、淋洗和洗脱条件,比较了C18柱和分子印迹柱对异丙酚血浆样品的前处理效果;利用膜分离的方法来分离全血中的异丙酚,筛选出合适的膜、萃取液和泵速;把膜分离、分子印迹固相萃取和课题组之前研究的异丙酚光纤荧光检测系统结合起来,分析异丙酚的血药浓度。结果:(1)印迹聚合物选择性的结合异丙酚;紫外光照射法制得的印迹聚合物对异丙酚的结合量高于热聚合法制得的印迹聚合物;聚合温度越高,聚合反应进行的越完全,相应的聚合物的溶胀越差,表现为识别能力的降低;异丙酚和功能单体甲基丙烯酸以1:1的比例、氢键的方式缔合;当紫外灯离印迹膜5cm时,预聚溶液快速、完整的成膜;印迹聚合物从血浆中吸附出了的部分异丙酚。(2)以正己烷为活化剂,正己烷:甲苯(9:1)为淋洗剂,甲醇为洗脱剂后,分子印迹柱处理异丙酚样品的累计回收率高达99.94%;相比于C18固相萃取柱来说,MIP作为SPE的萃取材料前处理系列浓度的异丙酚血样,其线性和准确性都较好。(3)利用膜分离的方法来萃取全血中异丙酚的过程中,异丙酚血样浓度在1~20μg.ml-1范围内,选用聚醚砜超滤膜,血浆为透析液,5rpm的泵速和2min的透析时间,透析的平均回收率为25.50%,SD为0.54%。(4)选择100mg的聚合物量和5bar的进样压力在改进的异丙酚光纤荧光检测系统上分析全血中异丙酚的浓度,每分析一份样品仅需4.8分钟。结论:膜分离装置结合分子印迹固相萃取柱可以在线、快速的前处理异丙酚的全血样品,对血液无“损伤”,这对异丙酚光纤荧光检测系统来说是一个巨大的改进。


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