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子痫前期母亲胎盘BDNF表达及母胎Val66Met多态性及与新生儿结局的研究

张美艳  
【摘要】:第一部分子痫前期母亲胎盘BDNF基因表达的研究目的:通过分析子痫前期母亲产后胎盘组织中脑源性神经生长因子(Brain-derived neurotrophic factor,BDNF)基因的表达水平,探讨BDNF基因与子痫前期发病之间的关系。方法:收集2017年6月到2018年6月期间于青岛大学附属医院产科就诊的子痫前期孕妇21例为子痫组(PE组)及正常孕妇21例为健康对照组(control组),产后提取胎盘组织,通过RT-PCR及Western-blot技术在mRNA水平及蛋白水平对胎盘组织中BDNF基因表达水平进行检测。结果:在mRNA水平PE组BDNF基因表达水平低于control组,差异有统计学意义(T=2.337,P=0.0245);通过WB检测、图像分析后,PE组BDNF蛋白表达水平明显低于control组,差异有统计学意义(T=3.531,P=0.0011)。结论:BDNF基因在子痫前期患者的胎盘组织中呈现低表达趋势,该基因在子痫前期发生中作为保护性基因发挥作用,低表达可能导致疾病发生。第二部分子痫前期母亲BDNF单核苷酸位点Val66Met多态性研究目的:通过大样本分析子痫前期患者外周血DNA中脑源性神经生长因子(Brain-derived neurotrophic factor,BDNF)基因位点Val66Met单核苷酸多态性,探讨该位点与子痫前期遗传易感性的关系。方法:研究对象来自2014年1月至2017年12期间青岛大学附属医院产前诊断实验室所建立的子痫前期样本库,选取病例组1800例,对照组5000例,采用R i3863.4.3软件对相关因素进行剔除、匹配处理,对相关变量进行匹配后获得病例组1138例,对照组1342例。收集所有对象的外周血,提取外周血DNA,通过Taq Man探针荧光PCR方法对Val66Met位点进行单核苷酸多态性分析。对所有样本随机选取30例通过实时定量聚合酶链式反应扩增后对含有所选位点的片段进行直接测序,对探针所得结果进行准确性验证。统计所得结果,对Val66Met位点的单核苷酸多态性进行基因型及等位基因频率等分析。结果:1.产妇病例组与对照组临床资料分析显示:产妇年龄、BMI、孕次及产次等匹配后因素在两组间无统计学差异(P0.05);病例组产妇血压(收缩压和舒张压)明显高于对照组,差异有统计学意义(P0.05);病例组入院孕周及分娩孕周均小于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。2.相较于对照组,病例组中BDNF基因的Val66Met位点等位基因频率分布差异有统计学意义(X2=4.657,P=0.031,OR=0.884,95%CI=0.791-0.989),而基因型分布差异无统计学意义(X2=4.555,P=0.103),加性基因差异亦无统计学意义(X2=2.682,P=0.105,OR=0.856,95%CI=0.710-1.031)。结论:1.子痫前期导致产妇住院及分娩孕周减小,即需要医疗干预和分娩的时间提前。2.BDNF基因Val66Met位点的单核苷酸多态性可能与子痫前期遗传易感性相关。第三部分子痫前期母胎间BDNF单核苷酸位点Val66Met多态性分析及与新生儿结局的研究目的:通过分析子痫前期母亲娩出的新生儿临床资料,探讨子痫前期与新生儿不良结局的关系,并通过对子痫前期母胎配对样本的脑源性神经生长因子(Brain-derived neurotrophic factor,BDNF)基因位点Val66Met的分析,进一步探讨Val66Met多态性在母胎间遗传、传递关系。方法:选取2018年1月至2018年6月期间就诊于青岛大学附属医院新生儿科母亲明确诊断为子痫前期的新生儿及产妇为病例组200对,同时期于新生儿科住院治疗的母亲为正常孕妇的新生儿及产妇为对照组208对。收集研究对象临床资料,对新生儿进行胎龄匹配后分为30周,30~33+6周和34~36+6周三组,回顾性分析子痫前期与新生儿常见不良结局的关系。同时采用Taq Man探针荧光PCR对母胎外周血中BDNF基因位点Val66Met进行分析。随机选取20例进行直接测序验证检测结果的准确性。结果:1.病例组与对照组两组间母亲孕次、产次差异无统计学意义(P0.05),病例组新生儿出生体重、出生胎龄以及1分钟Apgar评分均较对照组明显降低,差异有统计学意义(P0.05)。2.对新生儿进行胎龄匹配后分组分析中,30周组和30~33+6周组患儿小于胎龄儿和支气管肺发育不良发病率病例组均明显高于对照组(P0.05),在34~36+6周组小于胎龄儿发病病例组高于对照组(P0.05);呼吸窘迫综合征、动脉导管未闭、脑白质损伤、颅内出血及坏死性小肠结肠炎在胎龄匹配后均没有统计学差异(P0.05)。3.病例组与对照组间母亲的BDNF基因位点Val66Met基因频率分布差异有统计学意义(X2=9.054,P=0.003,OR=0.630,95%CI=0.466-1.852),而基因型及加性基因无统计学意义(P0.05),与大样本数据结果一致;新生儿该位点的基因型分布、等位基因和加性基因分析在两组间均无明显差异(P0.05);传递性分析显示该位点在母胎之间的传递在两组之间没有明显差异(X2=4.896,P=0.086)。结论:1.子痫前期导致新生儿宫内生长受限,并可能影响胎儿肺部发育,导致小于胎龄儿、支气管肺发育不良发病率升高。2.新生儿BDNF基因Val66Met位点的单核苷酸多态性与子痫前期相关的新生儿不良预后可能没有相关性。


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