收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

空肠弯曲菌感染仔兔模型的建立及动物体内诱导基因的筛选

商宇伟  
【摘要】:空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni, Cj)是一种重要的食源性人兽共患病原菌。人感染Cj后主要引起细菌性胃肠炎(Bacterial gastroenteritis)和急性腹泻,免疫力低下者会导致心内膜炎、关节炎、骨髓炎、脑炎、败血症等全身性疾病。但迄今为止,对Cj致病性方面的研究尚不很清楚,其主要原因是缺乏合适的动物模型。本研究尝试建立空肠弯曲菌感染仔兔腹泻模型,探索该菌在仔兔模型体内的动态分布、免疫应答规律及可能的感染机制;并利用选择性捕获转录序列方法鉴定了空肠弯曲菌在感染兔体内转录的基因,取得了满意结果。 一、空肠弯曲菌致仔兔腹泻模型的建立 本研究选用初生仔兔为实验动物,因为相比啮齿类动物,兔在系统发育和生理构造上更相似于人类,初生动物还具有体内清洁、体型小、方便饲养和易于管理等优点。根据实验所得最佳建模条件,使用空肠弯曲菌NCTC11168为攻毒菌株,灌胃1×109CFU剂量感染经西咪替丁(50mg/kg)预处理的2日龄,体重为40+2g的仔兔。通过收集临床症状、病理变化、病原分离和致病性资料评价模型建立情况。结果显示空肠弯曲菌可人工感染仔兔并引起自限性的、水样腹泻症状;剖检发现主要病变是小肠积液、肠壁出现出血点,盲肠、结肠肿大,肠腔内充满水样内容物;组织病理切片显示盲肠黏膜出现坏死脱落,固有层小血管扩张、充血。病原分离鉴定结果证实各脏器感染菌株均为Cj。剂量反应实验显示腹泻疾病的程度与攻毒剂量、肠道细菌定植量正相关,至少106CFU细菌可引起仔兔可观察的腹泻症状和各肠道的定植;至少104CFU细菌可引起盲肠和结肠的定植。不同来源空肠弯曲菌分离株对仔兔致病性存在明显差异,说明该模型能够有效评价Cj的毒力强弱。 二、空肠弯曲菌仔兔体内感染动态分析 本研究在建立上述模型的基础上,分别在攻毒后12,24,36,48和60hr剖检仔兔,利用细菌分离及PCR方法分析Cj在体内各组织中的分布情况和变化规律;应用电子显微镜技术观察Cj侵入小肠上皮细胞后引起细胞形态变化规律;应用real-time RT-PCR技术检测Cj感染后仔兔小肠黏膜炎症趋化因子、细胞因子、抗菌物质和酶类的分泌量变化规律。研究结果显示Cj侵入血液的速度很快,对肝脏、肾脏等实质器官的黏附性无明显差异,并在48hr后被清除;Cj在盲肠和结肠中定植时间大于60hr,定植量高达108CFU/go扫描和透射电子显微镜结果显示Cj可黏附在肠绒毛,并在攻毒后24-36hr侵袭破坏部分上皮细胞;48-60hr可见部分上皮细胞脱落、凋亡,大量上皮内淋巴细胞浸润。Real-time RT-PCR结果显示感染后12hr可见IL-10和抗菌肽CAP-18的大量分泌,36hr时IL-18、CCL20分泌增加;60hr时IFN-y、IL-10、IL-8、iNOS发挥重要免疫作用。 三、选择性捕获空肠弯曲菌仔兔体内转录序列 本研究以空肠弯曲菌NCTC11168菌株为研究对象,采用选择性捕获转录序列(Selective capture of transcribed sequences, SCOTS)方法鉴定空肠弯曲菌NCTC11168在感染兔盲肠过程中细菌转录的基因序列。经过总RNA分离、cDNAs合成、PCR扩增、SCOTS、阳性克隆测序。结果共获得9个转录序列,按照其编码蛋白的功能分为4大类:新陈代谢蛋白、细胞表面蛋白、复制相关蛋白和应激相关蛋白。利用real-time RT-PCR对表达基因进行转录水平的验证,结果表明:pnp、katA、cj0609c、cj1481c和acs等5个基因与正常CCDA培养基中培养的11168菌株的基因转录水平相比,在感染兔盲肠组织中转录水平上调4.49-116倍,为进一步阐明筛选到的体内表达基因在Cj致病过程中的作用奠定了基础。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前12条
1 凌秀珍;仲伟法;论敏;李保民;潘国爱;;大黄对新生仔兔作用的实验观察[J];济宁医专学报;1983年01期
2 安继升;薛恒平;;仔兔补饲乳酸菌试验[J];中国微生态学杂志;1989年01期
3 J G Miller;富群华;;一种实用的家兔哺乳方式[J];上海实验动物科学;1985年02期
4 褚芳,罗厚良,万筱荣;“南昌兔”泌乳量与仔兔体重增长的关系[J];上海实验动物科学;1998年Z1期
5 李振;;微生态制剂对断奶仔兔生产性能及免疫的影响[J];中国微生态学杂志;2009年08期
6 崔锁荣;提高家兔繁殖率和仔兔离乳存活率的实验性探讨[J];上海实验动物科学;1996年Z1期
7 王荫槐;孙淑华;王安京;何同英;;剖腹产无菌仔兔的人工哺育[J];上海实验动物科学;1984年02期
8 李锦铭;张焕新;;改进实验用家兔繁殖方式的探讨[J];上海畜牧兽医通讯;1983年02期
9 郑燕;;兔妊娠后期注射甲状腺素影响仔兔生长的相关性分析[J];蚌埠医学院学报;2013年07期
10 张业彬,王荫槐,陈昱凯,岳秉飞,邢瑞昌;SPF家兔种群的建立[J];实验动物科学与管理;2003年S1期
11 崔锁荣;提高家兔繁殖率和仔兔离乳存活率的实验性探讨[J];上海实验动物科学;1996年S1期
12 李如松,阿扎提;繁育封闭群新西兰白兔的几点经验[J];地方病通报;1997年02期
中国重要会议论文全文数据库 前8条
1 陈胜;程广龙;徐建;江喜春;赵辉玲;;妊娠后期母兔血浆激素水平对仔兔的影响[A];首届(2011)中国兔业发展大会会刊[C];2011年
2 T.Gidenne;L.Fortun-Lamothe;谷子林;李素敏;黄玉亭;陈宝江;刘亚娟;陈赛娟;;仔兔断奶前后的饲养方案——消化特点和营养需要的回顾[A];第二届(2012)中国兔业发展大会专辑五[C];2012年
3 董会;董仲生;袁宗平;段云娇;祁治醇;;普安县长毛兔出巢仔兔的饲养管理[A];第三届(2013)中国兔业发展大会会刊[C];2013年
4 董发明;薛帮群;王天奇;赵叔娟;;仔兔中草药饲料配方的研究[A];纪念中国畜牧兽医学会中兽医学分会成立30周年中国畜牧兽医学会中兽医学分会2009年学术年会、华东区第十九次中兽医科研协作与学术研讨会论文集[C];2009年
5 骆世媛;;浅谈中小规模肉兔场仔兔饲养管理措施[A];第五届重庆饲料工业暨养殖行业发展战略研讨会论文集[C];2009年
6 谢月飞;;仔兔的科学饲养管理技术[A];第三届(2013)中国兔业发展大会会刊[C];2013年
7 肖育华;詹纯列;李新春;李建军;;清洁级兔配方乳的研制[A];中国实验动物学会第六届学术年会论文集[C];2004年
8 李斌;;家兔暗窝高效繁殖技术[A];第二届(2012)中国兔业发展大会专辑六[C];2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前7条
1 汤际亮;兔源B.subtilis的分离及早期灌服B.subtilis对仔兔的影响[D];西北农林科技大学;2013年
2 商宇伟;空肠弯曲菌感染仔兔模型的建立及动物体内诱导基因的筛选[D];扬州大学;2014年
3 董兵;日粮类型及外源添加剂对断奶仔兔消化道酶活影响的研究[D];河北农业大学;2004年
4 吕惠敏;复方中草药有效成分的分析及对兔肠道功能的影响[D];福建农林大学;2012年
5 彭易柱;L-精氨酸对獭兔繁殖性能及仔兔免疫功能的影响[D];吉林大学;2013年
6 倪俊芬;不同饲喂模式对獭兔的影响研究[D];河北农业大学;2011年
7 张玉华;纤维型腹泻断乳仔兔盲肠区菌群化及双歧杆菌对其调控的研究[D];河北农业大学;2003年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 韩素芳;仔兔如何管理[N];农民日报;2002年
2 石家庄新乐市木村乡人民政府 史雪林;冻僵仔兔咋救治[N];河北农民报;2006年
3 广西藤县太平镇善庆村农技校 叶笛;仔兔黄尿症治疗有良方[N];山西科技报;2002年
4 刘宁 江涛;养仔兔:这些工作得做好[N];山西科技报;2002年
5 ;仔兔哺乳好方法[N];瓜果蔬菜报.农业信息周刊;2005年
6 薛勇;怎样寄养仔兔[N];山西科技报;2005年
7 肃宁县农业局 刘明 刘五俊;怎样防治獭兔仔兔腹泻[N];河北科技报;2011年
8 杨小华;仔兔不同生长时期的饲养管理技术[N];中国畜牧兽医报;2005年
9 韩素芹;饲养仔兔讲技巧[N];湖北科技报;2002年
10 陈贵善;母兔为啥吃仔兔[N];福建科技报;2006年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978