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禽副粘病毒Ⅰ型鸽源分离株融合蛋白基因克隆、测序及致病性的研究

郁斌  
【摘要】: 利用RT-PCR技术,分别从禽Ⅰ型副粘病毒(APMV-Ⅰ)鸽源分离株(PPMV-Ⅰ) SZb9803株、NC9701株、NP9904株、PK9910株四株中成功扩增出预期大小为约0.5Kb 的F基因重要功能区片段;从PPMV-IS Za9803株、YZ9712株、PB9601株三株中 分别成功扩增出大小为1.7Kb的F基因,与预期的片段大小相一致,然后进一步 将上述四株PPMV-Ⅰ的F基因重要功能区片段和三株PPMV-Ⅰ的F基因分别克隆 入pGEM~R-T质粒载体中,进而对所克隆人的片段分别进行鉴定和序列测定及分析。 应用Clustal W软件将上述所得序列与从Genebank和其它文献资料中获取 的NDV基因Ⅱ、Ⅲ、Ⅵ、Ⅶ型代表株F基因1-389间的核苷酸序列及推导的氨基 酸序列进行同源性分析。结果表明:SZa9803株、SZb9803株、YZ9712株、NC9701 株、NP9904株、PB9601株六株PPMV-Ⅰ分离株与新城疫病毒(NDV)广东肇庆鸽 源分离株ZQ98-1株的核苷酸、氨基酸同源性分别为:96%-97%、96%-98%,与属 于NDV基因Ⅵ型b亚型的英格兰参考株1168/84株、威尔士参考株760/83株的 核苷酸、氨基酸同源性分别为:93%-95%、91%-94%;与基因Ⅱ型代表株Lasota 株的核苷酸、氨基酸同源性分别为:82%-83%、85%-87%;与基因Ⅲ型代表株F48E8 株的核苷酸、氨基酸同源性分别为:84%-85%,85%-87%;与基因Ⅶ型代表株YG97 分离株的核苷酸、氨基酸同源性分别为88%-89%、89%-91%。应用PHYLIP软件绘 制基因进化树,由进化树可见,SZa9803株、SZb9803株、YZ9712株、NC9701株、 NP9904株、PB9601株六株PPMV-Ⅰ分离株均属于NDV基因Ⅵ型的b亚型,且形成 一个独立的进化簇。而PK9910株则属于NDV基因Ⅱ型, 依据评价NDV致病性的三个致病指数(最小致死量致死鸡胚平均死亡时间 (MDT)、一日龄SPF雏鸡脑内接种致病指数(ICPI)、六周龄SPF雏鸡静脉接种 致病指数(IVPI)),我们对五株鸽源分离株的MDT、ICPI、IVPI三个指数分别进 行了测定,其结果分别为MDT 87.6-88.8小时,ICPI 1.38-1.53,IVPI 1.00-1.50。 为了能够更准确地评价这五株PPMV-Ⅰ分离株对鸽的致病性,我们根据在鸡体上 测定IVPⅠ的方法,在五周龄非免疫鸽体上进行了这五株PPMV-Ⅰ分离株的IVPⅠ 测定,其结果为:1.78-2.07。而PK9910分离株对鸡和鸽的IVPI值均为0。试验 结果表明:SZa9803株、YZ9712株、NC9701株、PB9601株四个鸽源分离株均属 于中速型NDV毒株,而对鸽则呈强致病性,相当于速发型NDV毒株。而PK9910 分离株属缓发型NDV毒株。 禽副粘病毒I型鸽源分离株融合蛋白基因克隆、测序及致病性的研究2 交叉血凝抑制(HI)试验比较PPW-I分离株与Lasota株结果表明:SZa9803 株、SZb9803株、YZ9712株、NC9701株、PB9601株虽与Lasota株有很高的血清 交叉反应,对同源血清(抗 SZa9803株血清)的 HI为 1:2’,而与异源血清(抗 Lasota株血清)的HI为 1:2’,而PK9910株与抗Lasota株血清的HI为 1:2’, 比其它五株叩W-I分离株与抗 Lasota株血清的 HI滴度(1:2‘)高,但己表现 出这五株PPMV-I分离株与Lasota株有差异。


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