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新城疫病毒融合蛋白单克隆抗体的研制

胡北侠  
【摘要】: 以国内新城疫病毒(Newcastle disease Virus,NDV)标准强毒株F_(48)E_8 接种10日龄SPF鸡胚,收集死亡鸡胚尿囊液经蔗糖密度梯度离心后获得较 纯的病毒。以纯化的NDV建立了间接ELISA方法,并用于单抗筛选的第 一检测系统。应用蓝斑筛选技术对表达NDV融合蛋白(Fusion Protein,F)的 重组鸡痘病毒(Recombinant Fowlpox Virus,rFPV)进行筛选后获得较纯的重组 病毒,通过间接免疫荧光(Immunofluorescence,ⅡF)试验证实了NDV F基因 在rFPV中的表达。用纯化的rFPV感染96孔细胞培养板上次代鸡胚成纤维 细胞(Chicken Embryo Fibroblast,CEF),建立了检测单抗的ⅡF方法,作为 单抗筛选的第二检测系统。 以纯化的NDV和经SDS-PAGE分离的NDV F蛋白免疫BALB/C小 鼠,应用淋巴细胞杂交瘤技术,经间接ELISA和ⅡF试验反复筛选并三次 亚克隆后共获得7株能够稳定分泌针对NDV F蛋白单克隆抗体的杂交瘤细 胞,分别命名为C_5-2-A_7、F_7-G_5、F_9-2-G_5、B_2-C8-F_(10)、C_(11)-C_6-E_2、55-C_2- A_9,51-F_6-F_7。其中前5株是用NDV全病毒作免疫原,后2株是用SDS- PAGE分离的F蛋白作免疫原。单抗的生物学特性鉴定表明:7株单抗均无 血凝抑制性(HI),而单抗中和性各有差异。此外,对单抗的免疫球蛋白 胡北侠:新城疫病毒融合蛋白单克隆抗体的研制 三 亚类、所针对的抗原表位,ELSA效价等进行了鉴定和研究。Western blot 结果显示:除F7-G,、Cll-C6-EZ外,其它单抗均能识别56KD的蛋白多肽; 其中 CS一2-A7、F7一GS、Fg一2一GS、BZ一CS一FI*,C;;一q一EZ 5株单抗的 ELSA效 价明显比 55-CZ-Ag,sl-F6-F7 2株高。用这 7株单抗对国内夕不同时期分离 的NDV毒株进行排谱发现,单抗几乎可以与所有毒株反应,表明所得的单 抗都是针对 NDV F蛋白的抗原保守区。


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