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山羊卵母细胞孤雌激活和孤雌胚体外发育的研究

张果平  
【摘要】: 本文对体外成熟山羊卵泡卵母细胞孤雌激活和孤雌胚体外发育进行了较为系统的研究,主要结果如下: 1、化学物质离子霉素、Ca-A23187和乙醇均能有效激活山羊卵母细胞。2.5μmol/L、5.0μmol/L及10.0μmol/L离子霉素对卵母细胞激活率和桑椹胚体外发育率分别为54.0%、58.2%、57.9%和1.5%、4.2%、0,差异均不显著(P>0.05)。5.0μmol/L、10.0μmol/L、15.0μmol/L和20.0μmol/L Ca-A23187对卵母细胞的激活率分别为31.0%、46.4%、41.8%和45.8%,其中10.0μmol/L Ca-A23187激活率显著高于5.0μmol/L激活率(P<0.05)。3%、7%、11%和15%乙醇对卵母细胞激活率分别为40.0%、61.4%、63.0%和67.9%。7%,11%和15%乙醇的激活率极显著高于3%乙醇组(P<0.01)。15%乙醇激活卵母细胞死亡率为15.4%,显著高于3%、7%和11%乙醇组卵母细胞死亡率(P<0.05)。7%和11%乙醇组桑椹胚发育率分别为3.5%和1.8%。 2、在含Ca~(2+)电激液中,分别用1.00kv/cm、1.25kv/cm、1.50kv/cm和1.80kv/cm电压,脉冲持续80μs,2次电脉冲刺激卵母细胞,其激活率分别为48.4%、54.3%、55.8%和45.1%,差异不显著(P<0.05)。增加刺激次数并不增加卵母细胞激活率,施以3次、2次和1次电刺激卵母细胞,其激活率及各细胞期的发育力没有明显差异(P>0.05)。电激液中没有Ca~(2+)不能有效激活卵母细胞。 3、体外培养18h、21h、24h、27h、30h、33h和36h的成熟卵母细胞,激活率分别为27.4%、38.4%、42.1%、58.2%、60.0%、64.7%和73.1%,培养36h、33h和30h卵母细胞激活率极显著高于18h、21h、24h卵母细胞激活率(P<0.01),27h卵母细胞激活率极显著高于18h和21h卵母细胞激活率(P<0.01),显著高于24h卵 母细胞激活率(P0.05)。培养24h和27h组桑堪胚发育率分别为2.2%和4.2%。 4、激活时随卵母细胞周围卵丘细胞层数增多,激活率显著下降。保留多于搜 层和3一4层卵丘细胞,卵母细胞无一活化,包裹1一2层卵丘细胞的卵母细胞激活 率仅为7.6%,极显著低于去除卵丘细胞的卵母细胞激活率(P0.01)。 5、离子霉素、Ca一A23 187、乙醇和直流电脉冲分别与6一DMAP或CB使用可 以提高其激活效率,但没有达到显著水平(P0.05)。细胞松弛素B或6一DMAP能抑 制卵母细胞第.二极体排出,使其形成二倍体孤雌胚。细胞松弛素B以形成2原核1 极体孤雌胚为主;6一DMAP以形成1原核1极体孤雌胚为主。 6、单倍体孤雌胚体外培养,2一4一细胞卵裂率、大于4一细胞发育能力与二倍体 相似(P0.05),大于8一细胞的发育力单倍体显著低于二倍体(P0.05),单倍体在体 外发育没有能够突破16一细胞,二倍体桑堪胚体外发育率为5.7%。孤雌胚体外发育 速度慢于正常受精胚胎,‘均质单倍体发育速度慢于二倍体。 7、培养系统对孤雌胚体外发育的影响比正常受精胚还要大。孤雌胚在TCM199 和SOF单一培养液中培养,不能突破8-细胞发育阻断。TCM199和SOF分别与山 羊颗粒细胞或输卵管上皮细胞组成的共培系统能部分克服孤雌胚体外发育阻断, 促进孤雌胚体外发育,而在16一细胞期后,输卵管上皮细胞构成的共培养系统比颗 粒细胞构成的共培养系统更有利于孤雌胚体外发育。


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