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芫花根总黄酮的药理作用和芫花根的化学成分研究

王莉  
【摘要】:芫花(Daphne genkwa Sieb.et Zucc)为瑞香科(Thymelaeaceae)植物,广泛分布于我国长江流域各省和黄河流域的部分地区。芫花是一种传统的中草药,在民间可用于治疗多种疾病。次生代谢物是中草药具有药理作用的物质基础,黄酮类化合物是芫花中含量较多的一种次生代谢物,具有抗氧化、抗肿瘤、免疫调节、抗炎以及镇痛等多种功效,且毒副反应少。然而,作为芫花主要成分的黄酮类化合物的药理活性研究迄今为止未见报道。而免疫紊乱是多种疾病的发病因素,炎症和疼痛是多种疾病普遍表现出一般临床表征。据此,本论文课题系统地研究了芫花根皮乙醇提物总黄酮的免疫调节、抗炎和镇痛的药理活性,并对芫花根皮的乙醇提取物进行了化学成分分析。其结果可小结为: 1 芫花根总黄酮的药理作用 1.1 免疫调节作用 以二硝基氯苯(dinitrochlorobenzol,DNCB)诱导小鼠迟发性超敏反应(delayed type hypersensitivity,DTH),以适量的环磷酰胺(cyclophosphamide,CY)分别诱导小鼠DTH增强和减弱模型,观察不同剂量的芫花根总黄酮(the total flavonoids of Daphne genkwa,DTF)对小鼠DTH反应的影响;以巯基乙醇酸钠诱生小鼠腹腔巨噬细胞,观察不同剂量的DTF对小鼠腹腔巨噬细胞生成IL-1的影响;以刀豆蛋白A(concanavalin A,Con A)诱导T淋巴细胞增殖,观察不同剂量的DTF对小鼠T淋巴细胞增殖和IL-2生成的影响;以超适剂量的DNCB诱导小鼠免疫耐受,观察DTF对小鼠T_S细胞亚群的影响。 实验结果表明,适量的DTF对CY诱导的小鼠免疫功能的增强和减弱均有显著的下调和提升作用,可显著促进腹腔巨噬细胞分泌IL-1,并可剂量依赖性的促进Con A诱导的小鼠T淋巴 扬州大学硕士学位论文 细胞增殖、IL一2的分泌。单独使用O丁F,适量可显著减弱超适量ONCB诱导的小鼠的免疫耐受, 与C丫合用能增强超适量ONCB引起的小鼠免疫耐受。 结论:O下F是细胞免疫功能具有双向调节作用,是细胞免疫调节的主要有效成分,其作用 机制可能是通过调节巨噬细胞活化、T淋巴细胞增殖、T淋巴细胞分泌IL一2以及Ts细胞相对数量 改变来起作用。 1.2抗炎作用 采用组胺诱导的血管通透性增加和角叉菜引起的大鼠炎症足肿胀为早期急性炎症模型, 以福氏完全佐剂(freund’5 eomplete adjuvant,FCA)引起的大鼠炎症足肿胀、脱脂棉引起的 肉芽肿为慢性炎症模型,采用内皮网状系统的吞噬作用为实验范本,观察O下F的抗炎功效。 实验结果表明,适量的OTF可显著的抑制组胺诱导的血管通透性的增加、角叉菜和FCA 引起的大鼠炎症足肿胀、脱脂棉引起的肉芽肿,促进内皮网状系统(r eticu!ar endothelial syatem, RES)的吞噬作用;并可减少炎症组织中介导炎症发生的丙二醛(MOA)、前列腺素E2( pGEZ)、 一氧化氮(NO)、白细胞介素一lp(lL一lp)和肿瘤杀伤因子一a(TNF一a)等炎症因子的产生, 抑制催化合成过量NO产生的诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的活力,提升具有清除氧自由基 能力的超氧化物歧化酶(500)、过氧化氢酶(CAT)的活力。 结论:O下F是抑制急性炎症和慢性炎症的主要有效成分,并提示,O丁F可能是通过抑制 早期炎症因子!L一lp和TNF一a的分泌,以减少户GEZ、MOA、NO等晚期炎症因子的产生; 通过提升500、CAT的活力清除氧自由基,以抑制脂质过氧化作用,进而减少MOA的产生; 通过抑制iNOS的活力防止过量的NO产生;通过抑制COX一2来减少PGEZ的产生;通过 RES的吞噬作用促进损伤组织的复原,这几种途径来发挥其抗炎的药理功效。 1.3镇痛作用 采用佐剂性关节炎(adjuvant arthrititis,从)大鼠为研究对象,研究0丁F对疼痛的抑制效 果。 实验结果表明,适量的O丁F可显著的增加AA大鼠的痛阂,降低大鼠的疼痛级别,减少炎 症组织中尸GEZ的产生,提升炎症组织中500和CA下的活力,抑制大脑中NOS活力使NO含量 减少,提升外周血中NOS活力使NO含量增加,并可抑制大脑海马区原癌基因C一FOS的表达。 王莉芫花根总黄酮的药理作用和芫花根的化学成分研究 结论:O下F是镇痛的有效成分,并提示OTF镇痛的机制可能是通过抑制COX一2的活力来减 少PGEZ的生成,通过抑制NOS的活力来减少脑组织中NO的含量,通过提升外周血NOS的活 力来促进NO的生成,通过提升500和CAT的活力来阻碍过氧化作用,通过增加中枢神经系统 中的内源性片肤含量,以最终达到镇痛的目的。 2芜花根的化学成分 2.1芫花根醉提物中、大极性组分的化学成分 利用硅胶柱层析和SephadexL日一20柱层析方法,从芫花根醇提物的中、大极性组分中, 分离、鉴定出18种化合物,包括9种黄酮类化合物、4种香豆素类化合物、4种二菇原酸醋 类化合物和,种凿醇类化合物。黄酮类化合物分别是3一经基毛瑞香素01(A01)、2气经基一3- 甲氧基毛瑞香素01(A02)、3一甲氧基毛瑞香素日(A03)、3”一甲氧基毛瑞香素G(A04)、了- 甲氧基毛瑞香素H(A05)、芫花素(A06)、芫根戒(A07)、毛瑞香素B(A08)和毛瑞香 素G(Aog);香豆素类化合物分别是7一经基一6一甲氧基一4[(2-氧杂一阵,一苯并毗喃一7一基)一氧 基]·ZH一1一苯并叱喃一2一酮(A10)、伞形花内醋(All)、瑞香戒(A12)、西瑞香素(A1


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