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大肠杆菌F18菌毛操纵子fed基因的克隆、表达及其生物活性的初步研究

张建军  
【摘要】:表达F18菌毛的大肠杆菌是断奶仔猪腹泻(Post-weaning diarrhoea, PWD)和仔猪水肿病(Edema disease, ED)的重要病原。F18大肠杆菌分F18ab和F18ac两种血清型。PWD和ED产生的前提条件是细菌能定植在宿主肠道黏膜表面,这个过程通常由菌毛黏附素介导。预防该类疾病可通过针对黏附素的抗体来阻断细菌的侵袭。猪体内动物试验表明:提纯的菌毛通常能产生一定的免疫保护性。由于菌毛在体外的表达受到各种复杂因素的影响,带有F18菌毛基因的菌株在体外培养时不一定就表达菌毛,目前尚未筛选到能使F18菌毛充分表达的理想的体外培养基,尤其是F18ac菌株菌毛的体外表达产量非常低。迄今为止,尚无任何商业化的疫苗用于该类疾病的预防。如何有效预防PWD和ED仍然是世界范围内有待解决的问题。本研究在国内外首次构建了能在体外分别良好表达F18ab和F18ac菌毛的两株重组菌,并对其作为免疫原的生物活性进行初步评估。 本研究根据国内外已发表的F18ab和F18ac菌毛操纵子fed的部分片段序列信息,用DNAstar软件分析设计了扩增菌毛操纵子基因全长的一对引物。分别以标准菌株107/86和2134p基因组DNA为模板成功地扩增出F18ab和F18ac的菌毛完整操纵子fed基因。 将编码F18ab和F18ac菌毛的fed全长操纵子基因分别克隆入pET-22b(+)表达载体,构建的重组质粒结合酶切分析和核苷酸序列分析。结果表明:插入的片段


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