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共表达NDV F 基因与H9亚型AIV HA基因的重组鸡痘病毒及其免疫效力

徐忠林  
【摘要】:利用鸡痘病毒(Fowlpox virus,FPV)表达载体pP12LS构建了能够同时表达NDV ZJ1株融合蛋白(Fusion protein,F)基因和H9亚型AIV血凝素(Hemagglutinin,HA)基因的重组鸡痘病毒rFPV-12LSFH9A,并对其免疫效力进行了评估。 1.表达NDV F基因和H9亚型AIV HA基因的重组鸡痘病毒的构建 首先从质粒pUCEF中切下F基因及与之相连的鸡痘病毒启动子P_(E/L),将其插入到质粒pP12LS的FPV基因组复制非必需区片段,重组质粒命名为pP12LSF;然后将质粒pFG11SH5H9中H9亚型AIV HA基因和启动子P_S切下并插入到pP12LSF,使分别调控F基因和HA基因转录的启动子P_(E/L)和P_S以反向方式连接,获得转移载体pP12LSFH9A。用该转移载体转染经预先感染FPV(282E4株、大空斑)的鸡胚成纤维细胞(CEF)。通过在含有X-Gal的营养琼脂上挑选蓝色病毒蚀斑和多次蚀斑克隆纯化后,获得稳定生长的重组鸡痘病毒(rFPV-12LSFH9A)。PCR检测证实了F基因和HA基因已成功插入到FPV的基因组;间接免疫荧光试验结果表明重组病毒能够同时正确表达F和HA蛋白。 2.共表达NDV F基因和H9亚型AIV HA基因的重组鸡痘病毒rFPV-12LSFH9A的免疫效力试验 2.1 试验鸡接种rFPV-12LSFH9A后抵抗NDV强毒攻击的免疫保护作用 7日龄SPF雏鸡随机分为9组,每组8只,其中7组分别于颈部皮下接种rFPV_(LP)-12LSFH9A、rFPV_(282E4)-12LSFH9A、rFPV-FH9A、rFPV_(LP)-12LSF、rFPV_(282E4)-12LSF、FPV_(LP)、FPV_(282E4),剂量皆为10~4PFU/羽,再用PBS以0.2ml/羽的量接种1组,另一组通过肌肉接种ND油苗(0.2ml/羽)。免疫后14~21天,除FPV、PBS组外,各种疫苗均可诱生针对NDV F蛋白的间接ELISA抗体,至免


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