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致断奶仔猪腹泻、水肿病大肠杆菌F18菌毛a、b、c因子单克隆抗体的研制及初步应用

王雷  
【摘要】:以表达F18ab菌毛参考菌株107/86(O139:K12:H1)及F18ac菌毛参考菌株2134(O157:H19)为研究对象,摸索出F18菌毛表达的最佳条件。将1‰甲醛灭活的以上两种细菌分别免疫BALB/c小鼠,利用淋巴细胞杂交瘤技术,用直接玻板凝集法筛选出11株能稳定分泌针对F18菌毛特异单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株1B3、1B7、1E3、2E9、3B2、3C2、3C3、4D7、5E9、5H4和6C4。其中382和5E9为a因子特异McAb,在直接凝集试验中与F18ab、F18ac菌株都反应;1B3、3C2、3C3为b因子特异McAb,只与F18ab菌株反应;1B7、1E3、2E9、4D7、5H4和6C4为c因子特异McAb,只与F18ac菌株反应。这些MCA细胞培养上清对F18ab菌毛的参考菌株107/86和F18ac菌毛参考菌株2134的直接凝集价最高可达1:2~6,腹水单抗直接凝集效价可达1:2~(13)。特异性检测结果显示,上述单抗与表达猪源产F4、F5、F6和F41粘附素菌株、鸡源产Ⅰ型菌毛菌株及沙门氏菌不发生凝集反应。 应用我们所研制的单抗对64株含F18 fedA基因的断奶仔猪腹泻和水肿病大肠杆菌分离株进行了检测,结果显示:上述分离株F18菌毛的检出率为34.37%,其中F18ac菌株占95.45%(21/22),F18ab菌株占4.54%(1/22)。F18菌毛阳性分离株的O血清型除了常见血清型O139外,还有非常见血清型O107和O131等。


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