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噬菌体展示日本血吸虫SSj14单抗的模拟表位及免疫保护性研究

王欣之  
【摘要】:目的:用日本血吸虫保护性单抗ssj14从噬菌体随机十二肽库中筛选日本血吸虫(schistosoma japonicum,sj)的保护性模拟抗原表位,并研究其在日本血吸虫保护性免疫预防中的作用及机理。 方法:用纯化的ssj14单抗筛选噬菌体展示随机十二肽库,经三轮筛选,阳性噬菌体克隆得到富集,并以常规ELISA法检测到噬菌体单个克隆,同时随机挑取33个阳性噬菌体克隆进行测序,得到11种多肽序列。用11个噬菌体克隆分别与虫卵可溶性抗原(SEA)进行竞争ELISA试验以检测噬菌体克隆的免疫活性,同时用ssjl4单抗对噬菌体克隆进行Western-blotting分析。根据所得的检测结果,选取3个具有免疫活性的噬菌体克隆及富集后的混合噬菌体,按1.5×10~(11)pfu/鼠的剂量与弗氏佐剂混合,在0,2,4周,皮下注射免疫BALB/c鼠,以原始肽库和TBS为对照组。于末次免疫后两周,按40±1条/鼠腹部贴片感染日本血吸虫尾蚴。攻击感染42天后剖杀所有小鼠,计数获检虫体数和虫卵数,计算各组减虫率和减卵率。分别在免疫及攻击感染0,2,4,6,8,12周时,小鼠眼眶窦采血,常规方法分离血清,检测三免之后小鼠血清中IL-12的浓度以及小鼠血清内抗体滴度。选择上述一条代表性多肽HNNSLPFFKLAT人工合成后,与BSA偶连,分别以弗氏佐剂和IL-12(1ug/鼠)为佐剂,按合成多肽40ug/鼠剂量免疫小鼠。分别以合成多肽和SEA为抗原建立ELISA方法,检测40份小鼠感染血清和20份小鼠健康血清并分析比较。 结果:三轮筛选后,阳性噬菌体得到有效富集,直接ELISA检测到阳性克隆率为90%,对30个随机阳性噬菌体克隆进行测序,得到11种多肽序列,分别为


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