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断奶仔猪源大肠杆菌毒力因子的分子流行病学及F18菌毛部分特性的研究

成大荣  
【摘要】:致病性大肠杆菌引起的仔猪水肿病和断奶仔猪腹泻仍然是危害养猪业的重要疾病。在相关毒力因子基因序列分析的基础上,建立了大肠杆菌菌毛(F18、K88、K99、987P、F41)、毒素(ST、LT、Stx)及毒力岛(LEE毒力岛、HPI毒力岛)的特异性PCR检测,并对140株分离自断奶仔猪腹泻病例、76株分离自断奶仔猪水肿病病例、24株分离自断奶仔猪并发水肿病和腹泻病例的大肠杆菌进行了系统检测。结果表明,在上述240株致病性大肠杆菌中,毒素基因检测阳性为108株,其中VTEC 60株,ETEC 24株,VTEC/ETEC 24株,未发现Stx1~+、Stx2~+大肠杆菌。VTEC仅见于断奶仔猪水肿病病例,占所分离总菌株数的78.95%(60/76):ETEC仅见于断奶仔猪腹泻病例,占所分离总菌株数的17.14%(24/140):VTEC/ETEC常见于断奶仔猪并发水肿病和腹泻病例,占所分离总菌株数的100%(24/24)。这些研究资料表明,约84%(84/100)的断奶仔猪水肿病与VTEC或VTEC/ETEC相关,约29.27%(48/164)的断奶仔猪腹泻与ETEC或VTEC/ETEC相关。随机挑取上述大肠杆菌164株,用标准的玻板凝集试验对其O抗原进行了检测,证明分离自江苏部分地区不同猪场的断奶仔猪水肿病/腹泻病例的大肠杆菌至少有2D个O抗原型,其中。139为优势O抗原型(占所测菌株的40.24%),Stx2e~+大肠杆菌的抗原型主要有O139(81.82%)、O138、O135、O141、O5、O80、O73和O161,ST-Ⅰ~+大肠杆菌的抗原型主要为O139、O141和O161。 通过对240株断奶仔猪源大肠杆菌菌毛基因的检测发现,菌毛基因检测阳性的大肠杆菌共有72株。其中,9株分离自断奶仔猪腹泻病例的大肠杆菌,虽然同时带有K88、K99和F41菌毛基因,但体外培养后仅K88菌毛为单抗检测阳性:在63株F18菌毛基因检测阳性菌株中,F18ab~+和F18ac~+分别为53株和10株,共占ETEC或VTEC/ETEC菌株的71.43%(60/84),仅占ETEC菌株的12.5%(3/24)。以O抗原型和毒素基因检测结果为判断依据,可以得出以下结论:(1)F1 8ab~+大肠杆菌的抗原型主要为O139、O141、O80和O161,其中O139为优势血清型(占73.58%);(2)60%(6/10)F18ac~+大肠杆菌的抗原型为O139:(3)K88+K99+F41基因检测阳性大肠杆菌的O抗原型未能确定;(4)K88~+菌株主要为ST-Ⅱ~+,F18ab~+菌株多数为Stx2e~+(98.11%),而F18ac~+菌株全部为ST-Ⅰ~+(100%);(5)VTEC的菌毛基因类型主要为F18ab(61.67%),VTEC/ETEC的菌毛基因类型主要为F18(95.83%,其中F18ab~+为62.5%,F18ac~+为33.33%),ETEC的菌毛基因类型包括K88+K99+F41(37.5%)和F18(12.5%,其中F18ab~+为4.17%,F18ac~+为8.33%)。


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