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表达鸡传染性喉气管炎强毒gB基因的重组鸡痘病毒的构建及其免疫效力

夏晓莉  
【摘要】: 鸡传染性喉气管炎(Infectious Laryngotracheitis,ILT)是由鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)引起的鸡的急性上呼吸道传染病。该病分布于世界各地,可引起鸡的死亡和产蛋下降而造成严重的经济损失,被国际兽医局(OIE)列为B类疾病。目前国内外防制本病普遍采用弱毒疫苗。该疫苗虽然具有较好的免疫效果,但所有的弱毒疫苗都存在:毒力普遍偏强,接种后反应大;也能引起潜伏感染,使鸡终生带毒;可以由接种鸡传染给非接种鸡,在传播过程中毒力会返强等缺点。国内虽已有商业化的表达ILTV糖蛋白gB的重组鸡痘病毒,但免疫效果受FPV母源抗体的干扰。因此,急需研究更安全、有效的疫苗用于防制和消灭ILT。 本实验室前期研究表明,外源基因插入不同复制非必需区影响重组鸡痘病毒抵抗母源抗体干扰的能力,其中利用本室构建的转移载体p12LS获得的rFPVs都表现出较大的抗母源抗体干扰优势。糖蛋白gB是ILTV的205kDa糖蛋白复合物,能诱导机体产生高水平的体液免疫和细胞免疫,是ILTV的主要保护性抗原和感染所必需蛋白,与病毒吸附和穿入细胞有关。本研究根据已发表的ILTV中国王岗株的gB基因序列,设计了一对特异性引物,通过PCR方法扩增了ILTV中国王岗株的gB基因,并将之克隆入pGEM-T easy载体后进行测序,得到了阳性质粒pTgB。将pTgB中的ILTV糖蛋白gB基因再亚克隆至鸡痘病毒(FPV)转移载体p12LS中,得到了p12LSgB。将p12LSgB转染被亲本鸡痘病毒LP感染的CEF。经蓝斑筛选、纯化后获得的同源重组病毒rFPV-ILTVgB通过PCR方法鉴定,证明其基因组中含有ILTV糖蛋白gB基因,间接免疫荧光试验(IFA)也证明该重组病毒在其感染的CEF中表达了ILTV糖蛋白gB。 用该重组病毒rFPV-ILTVgB、商品化的ILTV弱毒苗及FPVLP株分组免疫35日龄的SPF鸡(每组10只鸡,分组隔离饲养)。并设非免疫对照组(5只鸡)。其中rFPV-ILTVgB和FPVLP株以106PFU/只的剂量、ILTV弱毒苗以1羽份/只的剂量进行免疫接种。免疫后21天用ILTV中国王岗株以0.4 mL剂量喉内接种攻毒,通过检测免疫后ILTV抗体水平、攻毒后发病率与死亡率等指标评价疫苗的免疫保护效力,比较重组鸡痘疫苗与常规弱毒苗之间的免疫效力差异。从攻毒后的免疫保护情况看,重组鸡痘病毒(50%的发病率和0%的死亡率)比非免疫对


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