收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

己烯雌酚免疫分析化学研究

王恒  
【摘要】: 以己烯雌酚(DES)为研究对象,合成了半抗原己烯雌酚-单-羧基甲基-醚(DES-MCME)和己烯雌酚-单-羧基丙基-醚( DES-MCPE),采用活性酯法和混合酸酐法将DES-MCME和DES-MCPE分别与牛血清白蛋白(BSA)、卵清蛋白(OVA)共价偶联,制备了人工抗原DES-MCME-BSA和DES-MCPE-BSA,包被原DES-MCME-OVA(包被原Ⅰ)和DES-MCPE-OVA(包被原Ⅱ)。根据紫外扫描图谱确定是否偶联成功并计算结合比,考察了反应物不同的摩尔比对最终偶联物结合比的影响。结果表明,当采用活性酯法偶联时,半抗原与BSA反应的投料摩尔比应在50:1左右为宜,生成的偶联物的结合比为10~30:1。 分别以DES-MCME-BSA和DES-MCPE-BSA免疫新西兰白兔制备抗血清。双向琼脂扩散法测定抗血清效价大于32:1后采集全血,离心分离血清,并以硫酸铵分步盐析分离抗血清中的抗体,冷冻干燥后-20℃保存。 以DES-MCME-BSA为免疫原制备的抗体Ⅰ对己烯雌酚无亲和力,而以DES-MCPE-BSA为免疫原制备的抗体Ⅱ对己烯雌酚具有特异性亲和力。以包被原Ⅱ进行固相包被,成功建立了己烯雌酚间接竞争酶联免疫吸附分析法。方阵实验确定了包被原Ⅱ的最佳包被浓度为1.5μg/ml,抗体Ⅱ的最佳工作浓度为1.5μg/ml。进一步研究了pH值、离子强度和有机溶剂含量对包被原Ⅱ和抗体Ⅱ的亲和作用的影响以及己烯雌酚对包被原Ⅱ和抗体Ⅱ反应抑制率的影响。结果表明:较低pH的反应介质有利于抗原抗体结合,pH6.6最佳。盐浓度对抗原抗体结合反应影响较小,NaCl浓度等于0.15mol/L时最有利于竞争抑制反应,随着盐浓度的增高,抗原与抗体的结合率缓慢下降。低浓度的甲醇有利于包被原Ⅱ和抗体Ⅱ的结合反应,甲醇含量大于15%时抑制包被原Ⅱ和抗体Ⅱ的结合,随着甲醇含量的增加,DES与抗体的亲和力呈明显的下降趋势。在优化条件下,建立了己烯雌酚对包被原Ⅱ和抗体Ⅱ结合反应的间接竞争ELISA标准抑制曲线,回归方程为I=21.00LogC+47.44,r=0.9953,相对标准偏差RSD%=8.54%(n=5)。IC50=1.32ng/ml , IC20=0.05ng/ml。 在相同条件下,结构类似物双酚A(BPA)对包被原Ⅱ和抗体Ⅱ结合反应的抑制曲线方程为I=18.84LogC+31.214,r=0.9871。IC50=9.93μg/ml,抗体Ⅱ与双酚A的交叉反应率为0.013%。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 李广领;姜金庆;陈锡岭;张淑静;王自良;;吡虫啉残留酶联免疫吸附检测方法的建立[J];食品科学;2011年12期
2 贾彦博;孙岚;屠海云;王红青;;超高效液相色谱法同时测定化妆品中多种雌激素[J];日用化学工业;2011年04期
3 王和兴;周颖;姜庆五;;超高效液相色谱-四极杆飞行时间串联质谱法同时分析奶粉中9种雌激素[J];分析化学;2011年09期
4 贾彦博;王红青;韩里明;;液相色谱-串联质谱法快速测定饮用水中6种雌激素[J];分析测试学报;2011年07期
5 龚剑;冉勇;陈迪云;杨余;;珠江三角洲两条主要河流沉积物中的典型内分泌干扰物污染状况[J];生态环境学报;2011年Z1期
6 ;[J];;年期
7 ;[J];;年期
8 ;[J];;年期
9 ;[J];;年期
10 ;[J];;年期
11 ;[J];;年期
12 ;[J];;年期
13 ;[J];;年期
14 ;[J];;年期
15 ;[J];;年期
16 ;[J];;年期
17 ;[J];;年期
18 ;[J];;年期
19 ;[J];;年期
20 ;[J];;年期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 陈德坤;雷莉辉;郑增忍;曲志娜;刘爽;王建华;张佩君;;己烯雌酚单抗的制备与鉴定[A];全国首届动物生物技术学术研讨会论文集[C];2004年
2 杜凌云;庞玉波;张霞;宋于燕;王术皓;;时间分辨荧光免疫分析同时测定己烯雌酚和双酚A[A];中国化学会第十届全国发光分析学术研讨会论文集[C];2011年
3 蒋经伟;金米聪;陈为能;潘斌;朱玉林;徐震宇;;食品猪肉监控物己烯雌酚与盐酸克仑特罗残留研究[A];新世纪预防医学面临的挑战——中华预防医学会首届学术年会论文摘要集[C];2002年
4 洪燕;王吉贵;张鹏;于福先;刘维全;;己烯雌酚残留小鼠不同组织的基因表达差异分析及部分基因的克隆[A];全国动物生理生化第十次学术交流会论文摘要汇编[C];2008年
5 王庆伟;王子旭;陈耀星;;己烯雌酚对成年雄性金黄地鼠PALS淋巴细胞增殖和凋亡的影响[A];中国畜牧兽医学会动物解剖学及组织胚胎学分会第十六次学术研讨会论文集[C];2010年
6 邹立宏;武现军;李玉荣;霍书英;;传染性支气管炎病毒对雏鸡内分泌指标的影响[A];全国动物生理生化第十次学术交流会论文摘要汇编[C];2008年
7 杜凌云;岳巧丽;姚型军;薛泽春;王术皓;;时间分辨荧光免疫分析同时测定己烯雌酚和双酚A[A];第六届全国环境化学大会暨环境科学仪器与分析仪器展览会摘要集[C];2011年
8 沈富林;黄士新;曹莹;孙亚云;王迪楼;;LC-MS分析饲料中的己烯雌酚[A];2004年全国有机质谱学术交流会论文集[C];2004年
9 周福林;章竹君;罗丽荣;;鲁米诺-高碘酸钾-己烯雌酚化学发光体系的研究[A];第八届全国发光分析暨动力学分析学术研讨会论文集[C];2005年
10 庄惠生;王术皓;王琼娥;;雌二醇类环境内分泌干扰物的免疫分析研究[A];中国化学会第十四届有机分析及生物分析学术研讨会会议论文摘要集[C];2007年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 王术皓;环境中雌二醇等微量荷尔蒙物质的免疫分析、化学发光分析研究[D];东华大学;2006年
2 陈德坤;已烯雌酚免疫分析的研究[D];西北农林科技大学;2004年
3 张静;川楝素免疫分析方法及其应用研究[D];西北农林科技大学;2008年
4 徐敦明;植物源杀虫物质鬼臼毒素的酶免疫分析及环境安全性研究[D];西北农林科技大学;2005年
5 张奇;倍硫磷和速灭威半抗原分子设计及其免疫效果研究[D];南京农业大学;2007年
6 张明翠;邻苯二甲酸酯类环境激素的荧光免疫分析研究及应用[D];东华大学;2006年
7 刘毅华;对硫磷半抗原分子设计研究[D];浙江大学;2008年
8 冯屹;同时检测多种环境激素污染物的液相免疫芯片技术研究[D];华中农业大学;2010年
9 王姝婷;农药多簇人工抗原的免疫特异性及多残留免疫金技术[D];浙江大学;2008年
10 余宇燕;环境中微量氯苯酚类环境激素的免疫分析方法研究[D];东华大学;2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 王恒;己烯雌酚免疫分析化学研究[D];扬州大学;2006年
2 陈小锋;克伦特罗免疫分析化学研究[D];扬州大学;2005年
3 晁博;喹烯酮残留标示物的ELISA检测方法研究及半抗原设计与合成[D];中国农业科学院;2006年
4 李立;苦马豆素单克隆抗体的制备及鉴定[D];西北农林科技大学;2007年
5 侯春喜;人参皂苷Rb1多克隆抗体与单克隆抗体的制备及鉴定[D];吉林大学;2006年
6 董海洲;诺氟沙星免疫分析化学研究[D];扬州大学;2007年
7 张献忠;溴氰菊酯农药残留免疫检测技术研究[D];中国农业科学院;2008年
8 韩明杰;苯并二氮(艹卓)及苯环利定与载体BSA复合物的合成[D];吉林大学;2009年
9 张伟东;药物及育发产品中己烯雌酚和双烯雌酚的卫生检测新方法研究[D];河北医科大学;2011年
10 刘晶;己烯雌酚的同源与异源ELISA检测方法的建立[D];中国人民解放军军事医学科学院;2011年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 李力 邹争春;己烯雌酚:孕妇的大忌[N];健康报;2007年
2 李力 邹争春;己烯雌酚:孕妇的大忌[N];农村医药报(汉);2007年
3 朱定荣实习生 李涛;“龙文塔”饲料遭遇“己烯雌酚”真相调查[N];消费日报;2007年
4 盛文;子宫内暴露于己烯雌酚与先兆子痫相关[N];中国医药报;2007年
5 张文樸;警惕肉食品残留激素的危害[N];大众科技报;2007年
6 山东省东平县 延平;孕畜忌用药物[N];河北农民报;2010年
7 郑永辉;鲜为人知的阴道腺病[N];农村医药报(汉);2007年
8 空军总医院 王琳;当防“环境致肥因子”偷袭[N];保健时报;2010年
9 记者 王爱娥;农药残留降解与检测技术取得6项实破[N];农资导报;2006年
10 吕乃群;治病不能盲目模仿[N];卫生与生活报;2007年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978