收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

鹅细小病毒常州株NS1和VP1基因序列分析及NS1基因的表达

陈希  
【摘要】: 本研究根据Genbank发表的GPV B株全基因组序列,设计并合成引物,用聚合酶链式反应技术扩增GPV中国分离株CZ的NS1基因和VP1基因,结果获得大小分别约为1.9kb、2.2kb的片段。将该片段分别进行克隆及序列测定,并与GPV国内外部分已发表的毒株序列及番鸭细小病毒的序列比较。结果表明,我国地方分离株与国内外鹅细小病毒相比,NS1基因和VP1基因均表现出较高的同源性。CZ株与番鸭细小病毒FM株相应序列比较发现相两者具有较近的亲缘关系。 将NS1基因片段从pcDNA3.1载体切下,克隆入pGEX-6p-1中,转化BL21感受态细胞。阳性菌经测序正确后,按1:100比例接种2mL LB液体培养基,过夜培养,再以1:100比例接种10mL 2×YT液体培养基,37℃200rpm摇4 h后,加0.5mM IPTG;诱导5 h后,终止培养,进行SDS-PAGE。结果发现,NS1能够得到高效可溶性表达,命名为GST-NS1。对表达条件进一步优化,发现在不同IPTG工作浓度的诱导下,表达产物均呈高效可溶性表达。将表达产物免疫小鼠获得的多抗进行IFA和Western-blot实验结果表明,GST-NS1具有相应的抗原表位。 将NS1基因片段与杆状病毒转座载体pFastBac1连接,筛选出重组转座载体pFastBac1-NS1,转座含有杆状病毒穿梭质粒的大肠杆菌DH10Bac感受态细胞后,获得重组穿梭质粒rBacmid-NS1;将重组质粒DNA转染Sf9昆虫细胞,获得了含有GPV CZ株NS1基因的重组杆状病毒rNS1。重组病毒感染Sf9细胞后,用NS1的原核表达产物免疫小鼠的阳性血清进行IFA和Western blot检测,结果表明:构建的重组杆状病毒能够在昆虫细胞中表达GPV CZ株的NS1蛋白,且NS1蛋白得到很好的加工修饰,为NS1功能研究奠定了基础。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 马磊;董浩;蒋运博;段小波;谷松至;胡桂学;;鹅细小病毒研究进展[J];中国畜牧兽医;2011年06期
2 于天飞;仇铮;马波;高明春;张文龙;王君伟;;鹅细小病毒非结构蛋白B细胞线性抗原表位的鉴定及抗原表位区分子特性分析[J];中国预防兽医学报;2011年08期
3 杨霞;陈少渠;李建丽;王川庆;王泽霖;;H9N2亚型禽流感病毒非结构蛋白基因NS1的表达及其单克隆抗体的研制[J];中国兽医学报;2011年09期
4 ;[J];;年期
5 ;[J];;年期
6 ;[J];;年期
7 ;[J];;年期
8 ;[J];;年期
9 ;[J];;年期
10 ;[J];;年期
11 ;[J];;年期
12 ;[J];;年期
13 ;[J];;年期
14 ;[J];;年期
15 ;[J];;年期
16 ;[J];;年期
17 ;[J];;年期
18 ;[J];;年期
19 ;[J];;年期
20 ;[J];;年期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 吕雪峰;吉凤涛;刘云志;苏双;;鹅细小病毒研究现状[A];低碳经济与科学发展——吉林省第六届科学技术学术年会论文集[C];2010年
2 万春和;朱海侠;黄瑜;彭春香;程龙飞;施少华;傅光华;陈红梅;;一株鹅细小病毒全基因特征分析[A];第四届中国水禽发展大会会刊[C];2011年
3 朱小丽;程晓霞;陈仕龙;林锋强;王劭;陈少莺;;鹅细小病毒杂交瘤细胞株的建立与筛选[A];福建省科协第八届学术年会分会场“转变饲养方式,促进海西畜牧业和谐发展”学术年会论文集[C];2008年
4 尚毅;董嘉文;孙敏华;黄秋芳;吴玄光;胡奇林;;鹅细小病毒LAMP快速检测方法的建立[A];中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第八次学术研讨会论文集[C];2010年
5 徐高原;王祥;陈焕春;徐晓娟;李自力;何启盖;;乙型脑炎病毒NS1基因重组伪狂犬病毒的构建[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立20周年庆典暨第十次学术研讨会论文集(上)[C];2003年
6 刘春国;刘明;杨涛;张云;;H5N1亚型禽流感病毒NS1基因在昆虫细胞中的表达[A];中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次研讨会论文集[C];2005年
7 陈宗艳;李传峰;刘光清;;鹅细小病毒VP3基因表达及其抗体检测ELISA方法的初步建立[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会第十五次学术研讨会论文集[C];2010年
8 吴丹;仇华吉;李昌文;薛强;周艳君;童光志;李景鹏;韩孝成;刘慧敏;;猪细小病毒SY-99株非结构蛋白NS1基因的克隆及序列分析[A];猪的重要传染病防治研究新成果——中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第五届理事会第二次全体会议暨防检疫专业委员会第7次学术交流会论文集[C];2002年
9 李琳;王楠;辛英;姚新华;;鹅细小病毒PCR诊断方法的建立和初步应用[A];吉林省畜牧兽医学会2007学术年会论文集[C];2007年
10 仇华吉;金吉东;田志军;周艳君;王云峰;童光志;;NS 2A序列不利于日本脑炎病毒NS1基因的体外表达[A];猪的重要传染病防治研究新成果——中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第五届理事会第二次全体会议暨防检疫专业委员会第7次学术交流会论文集[C];2002年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 李雪梅;鹅细小病毒和番鸭细小病毒部分基因组克隆、序列分析及VP2-VP3基因的表达[D];中国人民解放军军需大学;2001年
2 吴丹;猪细小病毒NS1基因与VP2基因的克隆、表达及VP2基因免疫的研究[D];东北农业大学;2002年
3 布日额;GPV VP及NS基因克隆及其原核表达产物的研究和应用[D];东北农业大学;2005年
4 徐高原;猪乙型脑炎与伪狂犬病二价基因工程疫苗研究[D];华中农业大学;2005年
5 丁轲;鹅细小病毒VP3基因与鹅白细胞介素-2基因分泌性融合表达载体的构建及在乳酸杆菌中表达的研究[D];四川农业大学;2006年
6 鲜思美;水禽重要疫病的多重PCR与基因芯片检测技术研究[D];四川农业大学;2009年
7 于天飞;鹅细小病毒非结构和结构蛋白B细胞线性抗原表位区的筛选[D];东北农业大学;2007年
8 杨金龙;小鹅瘟强毒在人工感染雏鹅体内侵染规律及对消化道菌群结构影响的分子解析[D];四川农业大学;2009年
9 赵丽荣;鹅细小病毒结构蛋白基因遗传进化分析及其基因免疫研究[D];东北农业大学;2006年
10 刘学芹;应用siRNAs抑制乙型脑炎病毒复制及乙型脑炎“自杀性”DNA疫苗研究[D];华中农业大学;2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 陈希;鹅细小病毒常州株NS1和VP1基因序列分析及NS1基因的表达[D];扬州大学;2007年
2 刘大鹏;鸭源抗鹅细小病毒卵黄抗体的制备[D];东北农业大学;2011年
3 荆志强;鹅细小病毒抗体胶体金免疫层析检测试纸条的研制[D];东北农业大学;2010年
4 马波;鹅细小病毒VP1基因的克隆、序列分析及表达载体的构建[D];东北农业大学;2002年
5 殷华平;猪细小病毒(PPV-SC1)的分离、鉴定及其非结构蛋白NS1基因的克隆和序列分析[D];四川农业大学;2004年
6 杜秋明;鹅细小病毒单克隆抗体的制备及单抗双夹心ELISA检测方法的建立[D];延边大学;2011年
7 黄诚;检测鹅细小病毒(GPV)强毒PCR方法的建立及人工感染GPV强毒在雏鹅体内分布规律的研究[D];四川农业大学;2003年
8 金吉东;日本脑炎病毒NS1基因的分子克隆与高效表达[D];延边大学;2002年
9 贺云霞;鹅细小病毒VP2基因的克隆、序列分析及原核表达[D];东北农业大学;2002年
10 李宝臣;鹅细小病毒VP3基因的克隆、序列比较及原核表达[D];东北农业大学;2003年
中国重要报纸全文数据库 前2条
1 ;禽病(26)小鹅瘟[N];江苏科技报;2001年
2 金坛市尧塘镇畜牧兽医站 王小挺;一例小鹅瘟继发球虫病的诊治[N];江苏农业科技报;2010年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978