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抗Ⅰ型糖尿病基因转化烟草、番茄的研究

郑卿  
【摘要】: Ⅰ型糖尿病是一种T细胞介导的针对胰岛β细胞的自身免疫性疾病,是基因和环境因素综合作用的结果。热休克蛋白HSP65以及串联了6个多肽P277的融合片段HSP65-6×P277均对Ⅰ型糖尿病起到明显的治疗作用。 本研究通过将具有抗Ⅰ型糖尿病作用的基因片段HSP65和融合片段HSP65-6×P277通过农杆菌介导,转化烟草叶片和番茄子叶,利用卡那霉素作为植物筛选标记,以期获得具有生物学活性抗Ⅰ型糖尿病的转基因烟草、番茄植株。研究取得了如下进展: 1)构建了植物表达载体pCAMBIA2301-HSP65、pCAMBIA2301-HSP65-6×P277,其中含有CaMV35s启动子,具有卡那霉素抗性筛选标记。经过检测、鉴定,我们确信构建的载体完全符合预期的设计。 2)通过电激法将pCAMBIA2301-HSP65、pCAMBIA2301-HSP65-6×P277质粒载体转化农杆菌EHA105,结果表明含有目的基因的质粒载体成功导入到了农杆菌中。 3)用含pCAMBIA2301-HSP65-6×P277的根癌农杆菌侵染烟草,在筛选培养基 上培养,共得到43株抗性植株,PCR鉴定34株为阳性。 4)将抗性苗移栽至温室培养,提取烟草总RNA,进行RT-PCR检测,结果表明目的基因已在烟草中成功转录为RNA。 5)用含有pCAMBIA2301-HSP65、pCAMBIA2301-HSP65-6×P277的根癌农杆菌分别侵染番茄子叶,经抗性筛选得分别到8株、9株抗性苗,PCR鉴定分别有6株、9株为阳性。 6)提取番茄的总RNA,RT-PCR结果显示,含载体pCAMBIA2301-HSP65的有5株已在番茄中成功转录为RNA,含载体pCAMBIA2301-HSP65-6×P277的有4株也在转录水平上表达。 7)转基因的遗传特性和蛋白表达的检测以及蛋白含量的测定还需要进一步工作。 本研究获得的转基因烟草和番茄的植株,为利用植物作为反应器生产抗Ⅰ型糖尿病疫苗的研究提供了材料,为实现植物可食用疫苗的商业化研究做了铺垫。


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