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鸡粪便中土霉素的HPLC检测及降解规律

韩艳  
【摘要】: 本研究首先建立了鸡粪便中土霉素含量的HPLC检测方法,并研究了土霉素在鸡粪便中的排泄规律,在实验室模拟条件下对鸡粪中土霉素的光稳定性以及细菌微生物对鸡粪中土霉素的消除的影响做了初步的研究。 粪样采用Mcllvaine缓冲液提取,然后用Waters OasisR HLB固相萃取小柱净化提取液,之后进行HPLC分析。所建立方法在0.25~20mg/L范围内线性良好。在0.25、0.5和1.0mg/kg三个添加水平,土霉素的平均回收率范围在78.89%~83.35%;变异系数范围为2.73%~4.58%,检测限(LOD)为0.25mg/kg,定量限(LOQ)为0.5mg/kg。 选用48只健康白羽肉鸡,随机分成4组,试验组分别混饲给予100、200和400 mg/kg的土霉素一次,然后在混饲给药结束后不同的时间点采集新鲜粪样。用HPLC法测定鸡粪中的土霉素浓度。在混饲给药后1h的鸡粪便中可检测到土霉素。100mg/kg饲料添加组土霉素的排泄量在采食后6h达到最高峰,峰浓度为13.58mg/kg,200mg/kg和400mg/kg饲料添加组土霉素排泄量达到最高峰的时间为混饲给药结束后8h,峰浓度分别为36.15mg/kg和50.73mg/kg。之后排泄量逐渐下降,分别在30h、62h和72h时各组鸡粪中均检测不出土霉素。 研究了光照和避光条件下,鸡粪中土霉素降解率的差异性。实验结果表明,在避光条件下,鸡粪中土霉素较稳定,在初始浓度为10mg/kg、20mg/kg、40mg/kg条件下,经过40d的培养,鸡粪中土霉素浓度下降为57.97%、78.88%、83.64%。在光照条件下,鸡粪中土霉素很易降解,经过40d后,在初始浓度为10mg/kg、20mg/kg、40mg/kg条件下,浓度下降为0、25.87%、31.48%。光照组和避光组的土霉素降解速率和半衰期差异很明显,其平均半衰期分别为117.5d和21.14d。 用指数负增长模型可以较好地拟合土霉素在鸡粪便中的动态降解过程,土壤鸡粪便中添加土霉素10、20和40mg/kg时,拟合曲线分别为:C=8.8365e~(-0.0469t)、C=19.315e~(-0.0328t)、C=39.461e~(-0.0252t),相关系数均大于0.97。平均消除半衰期为21.14d。 在灭菌、未灭菌及灭菌后添加特定土霉素降解菌的情况下,研究鸡粪中土霉素的消除规律。结果发现,经过40d的避光培养后,三组微生物条件不同的鸡粪中土霉素浓度变化差异明显,未灭菌组、灭菌组、灭菌后加降解菌组的平均半衰期分别为113.2d、62.9d、33.1d。 实验结果说明,鸡采食含土霉素的饲料后一定时间内会有相应量的土霉素药物随粪便排出体外,残留于鸡粪中的药物浓度随药物添加浓度的增加而增加。鸡粪中的土霉素浓度变化受光照和微生物的影响较明显,可以通过加强光照和添加一定浓度的降解菌来加速土霉素的降解,从而减少环境中药物残留。


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