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快速生长甘蓝型油菜的遗传转化及其T-DNA插入突变体的获得

吴磊  
【摘要】: 甘蓝型油菜(Brassica napus L.,AACC, 2n=38)是异源四倍体,基因组大小(1132Mb)约是拟南芥基因组(125Mb)的9倍,冬性油菜需要春化作用才能正常结实,生长周期长,这些因素限制了油菜遗传育种进程和功能基因组学的研究。根癌农杆菌介导的T-DNA转移是进行大规模转化的首选方法,广泛应用在模式植物的突变体库的构建中。 本文通过双元载体pCambia2031转化快速生长甘蓝型油菜(Rapid-cycle Brassica napus),获得和鉴定T-DNA插入突变体。通过农杆菌介导和蘸花法共获得T-DNA插入突变植株51株,其中通过农杆菌介导的方法获得28株,通过蘸花法获得23株,转化率分别为2.69%、1.04%。对11株T-DNA插入突变体进行了TAIL-PCR分析,6株有效扩增,以期为油菜功能基因组学提供有价值的材料; 此外,为了缩短油菜遗传转化的时间,消除选择标记基因带来的生物安全性问题,构建了天麻抗真菌蛋白基因(Gastrodia antifungal protein,GAFP)双T-DNA双元载体pSB130-SG1,转化快速生长甘蓝型油菜,为培育不含选择标记基因的抗真菌病的油菜新材料奠定了基础。


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