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人参须根中人参炔醇的结构确证及对肺癌细胞株A549的诱导分化作用研究

李杰  
【摘要】:人参(Panax ginseng C. A. Mey),为我国一种名贵中药品种,人参皂苷为其主要活性成分。近年来研究发现,人参根的醚溶主要成分——聚乙炔醇亦具有较广的药理活性,尤其具有显著抗肿瘤活性而备受重视。 肺癌,特别是非小细胞肺癌(nonsmall-cell lung cancer)为一种严重危害人类健康的常见病,已成为全球性重要公共卫生问题之一。本论文以人参须根为研究对象,就抗肺癌活性成分人参炔醇的提取工艺、结构确证及标准品标准、含量测定方法、人参总炔醇的β-CD包埋工艺及抗肺癌活性进行了研究,结果如下: 1、人参炔醇提取工艺的筛选 通过比较有机溶剂提取工艺与超临界CO_2提取工艺,结果表明:有机溶剂提取最优工艺为提取温度80℃,15倍量石油醚提取1次,提取时间1h,其中有效成分人参炔醇提取率达0.42‰;超临界CO_2萃取最优工艺为萃取温度45℃,夹带剂乙醇浓度为95%(用量为1.2L·kg~(-1)药材),萃取压力为30 MPa,萃取时间80min,人参炔醇提取率为0.45‰。该工艺与采用有机溶剂提取方法比较,具有经济、环保、效率高和成本低的特点。 2、人参炔醇成分的结构确证及标准品标准研究 经过反复研究,优选出了硅胶G柱层析对化合物A进行分离纯化,硅胶G柱层析与LH-20凝胶柱层析联用对化合物B进行分离纯化;二者经TLC薄层检测均为单一斑点,经HPLC归一化法检测纯度均不低于98.0%;采用上述方法分离纯化获得化合物A和B,经理化性质和波谱技术解析,确定化合物A为人参炔醇(panaxynol),化合物B为人参环氧炔醇(panaxydol);同时根据实验结果及文献数据建立了标准品质量标准草案。 3、人参炔醇成分的质量控制方法 经过反复试验,筛选出人参须根中人参炔醇、人参环氧炔醇、人参炔醇和人参环氧炔醇的HPLC含量测定方法;筛选出人参须根中人参总炔醇的紫外分光光度计含量测定方法。人参炔醇色谱条件为色谱柱:Elite C18柱(150 mm×4.6 mm,5μm);检测波长:230nm;流动相:乙腈-0.025%磷酸水溶液(70:30);流速:1.0mL·min~(-1);柱温:室温;人参须根药材中人参炔醇含量为0.42‰;人参环氧炔醇色谱条件为色谱柱:Elite C18柱(150mm×4.6mm,5μm);流动相:乙腈-水(54:46);检测波长:230nm;流速:1.0mL·min~(-1);柱温:室温;人参须根药材中人参炔醇含量为0.29‰;人参炔醇与人参环氧炔醇同时测定色谱条件为色谱柱: Elite C18柱(150 mm×4.6 mm,5μm);柱温:室温;流动相:乙腈-水梯度洗脱;流速:1.0 mL·min~(-1);检测波长:230nm;同时测定方法中,人参须根药材中人参炔醇含量为0.42‰,人参环氧炔醇含量为0.29‰;人参总炔醇UV测定条件为TU~(-1)901型紫外分光光度计;检测波长:230nm;人参须根中人参总炔醇含量为0.84‰。 4、人参总炔醇β-CD包埋工艺研究 通过稳定性试验,得出β-CD对人参总炔醇具有稳定作用。在此基础上以正交设计优化包合物制备工艺,经筛选最佳人参总炔醇的β-CD包合工艺为人参总炔醇与β-CD之比为1:8(W:W)、包合温度70℃,包合时间60min,该工艺操作简单,重复性好,可用于工业化生产。 5、人参总炔醇对肺癌细胞株A549的诱导分化作用研究 观察了人参总炔醇对肺癌细胞株A549的诱导分化活性。发现人参总炔醇对肺癌细胞株A549有较强抑制作用,具有时间和浓度依耐性。3.125~12.5μg·ml~(-1)表现为非细胞毒介导的生长抑制效应,25μg·ml~(-1)以上表现为细胞毒作用。


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