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同种异体移植骨髓间充质干细胞对大鼠重症急性胰腺炎的影响

陈大伟  
【摘要】:目的: 探讨同种异体移植骨髓间充质干细胞后对大鼠重症急性胰腺炎(SAP)胰腺及炎症因子的影响,以进一步明确间充质干细胞治疗重症急性胰腺炎的可能机制。 方法: 首先提取出生后14天的雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠的全骨髓细胞,经分离、纯化后,培养至第3代经鉴定为骨髓间充质干细胞后备后续实验用;将84只健康雌性Sprague-Dawl ey大鼠,体质量200±20g,随机分为假手术组(sham operation group,S组)、SAP对照组(severe acute pancreatitis group,SAP组)和治疗组(bone marrow mesenchymal cells transplant group,B组)。通过从胰腺被膜下多点缓慢均匀注射1ml 4%牛磺胆酸钠的方法建立SAP模型。S组和B组分别于造模后24小时经尾静脉注射间充质干细胞悬液lml(PBS重悬,浓度为1.0×106个/mL),SAP组注射1mlPBS。于注射后第1、7、14d三个时间点采用腹主动脉放血法将大鼠分批处死(每次每组6只),收集血清标本进行血清淀粉酶、TNF-α、IL-10检测;同时将部分胰腺组织置于10%中性甲醛溶液中固定,在光镜下观察胰腺的病理学改变并作病理评分;ELISA法检测TNF-α、IL-10,并观察同种异体移植间充质干细胞对上述各指标的影响。对相关数据进行统计学分析。 结果: 1、自幼鼠骨髓提取的全骨髓细胞分离培养后8小时即可看到有少量贴壁,第7天后即可达到90%融合,传至第三代后镜下可见形态均一、排列整齐的梭形细胞为主的细胞群。 2、经流式细胞术检测培养至第三代细胞表达率CD29+99.02%、CD44+80.86%、CD45+0.97%。 3、移植后24小时,在B组及S组大鼠胰腺组织中均可检测到Sry基因片段,B组大鼠第7天、14天Sry基因表达明显增强,S组较前无明显变化。 4、血清淀粉酶变化:SAP、B组血清淀粉酶在建模后各时间点与S组比较均明显升高,有显著差异(P0.01);移植第24小时后B组血清淀粉酶水平较SAP组低,但无统计学意义(P0.05);移植后7天血清淀粉酶B组与SAP组比较,淀粉酶含量明显降低(P0.01)。 5、胰腺组织学评分:①S组建模后各时间点组织学评分低,且无显著变化。②SAP、B组各时间点组织学评分与S组比较明显升高,均有显著性差异(P0.01)。③移植第1、7天后B组组织学评分低于SAP组,但无统计学差异(P0.05);在移植后14天B组与SAP组相比组织学评分有统计学差异(P0.05)。 6、血清TNF-α水平变化:①S组大鼠血清TNF-α水平较低,在建模后各时间点无明显变化,与SAP、B组相比明显较低,有显著差异(P0.01)。②B组与SAP组相比第1天无显著差异(PO.05);第7天B组血清TNF-α水平低于SAP组(P0.05);在14天时B组血清TNF-α水平明显低于SAP组(P0.01)。 7、血清IL-10水平变化::①S组大鼠血清IL-10水平极低,在建模后各时间点无显著性变化,且在各时间点上明显低于SAP、B组(P0.01)。②B、SAP组第1天无统计学差异(P0.05);第7天、14天时B组血清IL-10水平明显高于SAP组(P0.01)。 结论: 1、应用全骨髓差速贴壁培养法可以得到纯化的骨髓间充质干细胞。 2、移植的骨髓间充质干细胞可以特异的迁移至损伤的胰腺组织。 3、同种异体移植骨髓间充质干细胞可以缓解胰腺炎病情,促进胰腺损伤的修复。 4、同种异体移植骨髓间充质干细胞可以下调重症急性胰腺炎大鼠血清促炎细胞因子TNF-α水平,上调抗炎细胞因子IL-10水平。


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