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羟基喜树碱对PDGF刺激的大鼠肝星状细胞胶原基因表达及ERK信号通路的影响

殷亮  
【摘要】:目的:观察羟基喜树碱(HCPT)对血小板衍生因子(PDGF)刺激的大鼠肝星状细胞(HSC) a-SMA及Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达的影响,并探讨HCPT调控HSC细胞a-SMA及Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA的表达与ERK1/2信号通路之间的关系,为HCPT的抗肝纤维化临床运用奠定坚实实验依据。 方法:将大鼠肝星状细胞株(HSC-T6)用含10%小牛血清的高糖DMEM培养液培养,血清饥饿法同步化24小时后,分为4组,分别是:空白对照组(含0.4%小牛血清的高糖DMEM培养液);PDGF (10ng/ml)刺激组;PD98059+PDGF组(30μmol/L PD98059+10ng/mlPDGF); HCPT+PDGF组:(0.5mg/LHCPT+10ng/ml PDGF);在培养15分钟、30分钟、60分钟后用western blot方法检测ERK信号通路中ERK1/2蛋白磷酸化的表达情况;在培养12小时、24小时、48小时后,应用四甲基偶氮唑盐法(MTT法)检测HCPT对PDGF刺激的HSC-T6细胞增殖的影响;RT-PCR半定量检测HCPT对PDGF刺激的HSC-T6细胞a-SMA及Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达的影响。 结果:1、MTT法显示12 h、24 h、48 h,PDGF组HSC-T6细胞增殖明显;HCPT及ERK1/2阻断剂PD98059组,HSC-T6细胞增殖减少,与空白对照组相比,有统计学意义(P0.01),与作用时间呈正比;2、RT-PCR结果显示12h、24h、48h, PDGF作用的HSC-T6细胞a-SMA及Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA的表达明显高于空白对照组,有统计学意义(P0.01),与作用时间呈正比;HCPT和PD98059作用培养的HSC-T6细胞a-SMA及Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA的表达明显低于空白对照组,有统计学意义(P0.01),与作用时间呈正比;而HCPT与PD98059两组之间比较无统计学意义(P0.05);3、western blot结果显示15min、30min、60min, PDGF作用的HSC-T6细胞ERK1/2蛋白磷酸化表达增强,在30分钟时达到高峰,与空白对照组相比,有统计学意义(P0.01);HCPT和PD98059作用的HSC-T6细胞ERK1/2蛋白磷酸化表达降低,抑制在30分钟时达到高峰,与空白对照组相比,有统计学意义(P0.01);而HCPT与PD98059两组之间比较无统计学意义(P0.05)。 结论:HCPT可以抑制PDGF刺激的大鼠肝星状细胞的增殖和a-SMA及Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA的表达,抑制作用与ERK1/2信号通路有关。


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