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草鱼PKZ的功能分析

杨棚捷  
【摘要】:PKR-like(PKZ)是近年来在鲫鱼、斑马鱼(Danio rerio)、大西洋鲑(Salmo salar)、稀有鮈鲫(Gobiocypris rarus)和草鱼(Ctenopharyngodon idella)中报道的一个蛋白激酶,由于其N端为Z-DNA结合域(Za),因此,将它命名为PKZ(protein kinase containing Z-DNA binding domain)。有趣的是,PKZ的C-端也具有12个保守的eIF2a激酶催化域,与PKR(double-stranded RNA dependent protein kinase)非常相似。 初步研究表明PKZ与PKR非常相似,也与宿主细胞抗病毒有关。如鱼类PKZ基因的本底表达非常微弱,当干扰素等诱导后,表达上调。此外,与其eIF2a激酶家族其他成员一样,斑马鱼PKZ、大西洋鲑PKZ也能够抑制细胞蛋白质的合成。尽管如此,对Z-DNA如何调节及激活鱼类PKZ还不清楚。 基于此,我们根据本实验室已克隆的草鱼PKR-like(PKZ)(GU299765),构建了原核表达载体,并在体外进行表达、纯化。对所得草鱼PKZ全长蛋白进行功能分析表明:原核表达的草鱼PKZ本身就已经被磷酸化了。以磷酸酶使之去自磷酸化后,PKZ就失去了激酶活性。我们还发现Z-DNA可以使去自磷酸化的PKZ重新激活,然后磷酸化eIF2α。而Poly I:C却无法使之重新活化。体内实验表明:草鱼PKZ能够在翻译水平上极大地抑制荧光素酶的产生,说明它能够抑制蛋白质的翻译。其198位点突变后,几乎完全失去阻碍翻译的功能。此外,调节区Zα的缺失对其功能也影响极大。 另外,草鱼PKZ启动子的序列分析表明其上存在干扰素调节因子1(IRF-1)的结合位点。基于此,我们利用原核表达的IRF-1的多肽与PKZ启动子序列进行了琼脂糖凝胶阻滞实验,结果表明,IRF-1可与PKZ启动子结合。这个结果为我们构建真核表达载体,进一步在体内分析二者的结合情况,以及探索IRF-1调控草鱼PKZ的转录做好了准备。 依据本实验中所得结果,以及分析以往对PKZ的研究成果,我们在不排除前人提出的PKZ抗病毒通路的前提下,提出一条新路径以供参考。这条通路与以往PKZ激活的“被动”模式不同,我们认为PKZ有可能存在一条内源性激活通路,这种激活模式对于细胞应激占据主动地位具有重要意义。而此通路的提出在一定程度上弥补了旧通路的不足之处。


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7 ;草鱼出血病的防治[J];淡水渔业;1976年11期
8 赵厚会;鱼类暴发性出血病和草鱼出血病的区别与诊治[J];吉林畜牧兽医;1999年06期
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17 胡小玲;草鱼出血病中草药防治方法[J];中兽医学杂志;1998年04期
18 ;江苏开展草鱼出血病免疫试点工作[J];科学养鱼;2009年05期
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1 山东省东平湖河蟹育苗场 侯传宝;草鱼出血病与肝胆综合症的区别[N];江苏农业科技报;2009年
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4 江苏省水生动物疫病预防控制中心 邹勇 陈光芸;上半年江苏水产养殖病害回顾与下半年趋势分析[N];江苏农业科技报;2009年
5 省淡水研究所副研究员 林建斌;草鱼脆化无公害养殖技术(上)[N];福建科技报;2011年
6 特约记者 胡光安 本报记者 缪翼;我国首个水产疫苗产业化启动[N];中国渔业报;2011年
7 李雪树 李正飞;巧用食盐防治鱼病[N];中国渔业报;2009年
8 吉林省大安市龙沼镇新风养殖场 冯鹏;常见相似鱼病的辨症施治[N];河南科技报;2010年
9 胡志安 王书磊;提高我国水产免疫技术研究水平[N];中国渔业报;2010年
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