转化生长因子β_1联合血管内皮细胞生长因子体外诱导胚胎干细胞向内皮细胞分化

【摘要】： 目的:观察胚胎干细胞在体外不同条件下定向诱导分化血管内皮细胞的能力。 方法:成年昆明小鼠由南昌大学医学院动物科学部提供,经自然交配怀孕。取12.5～14.5d胎鼠,制作小鼠胚胎成纤维细胞饲养层。在小鼠胚胎成纤维细胞饲养层上培养扩增129×l/SvJ胚胎干细胞。将饲养层上扩增的胚胎干细胞以0.25%胰酶消化,按1×104/ml胚胎干细胞悬液悬滴在细胞培养皿的盖上,每滴10～20μL,不换液,3d后形成拟胚体。挑选状态好的拟胚体分3组:①转化生长因子β1诱导组、②血管内皮细胞生长因子诱导组、③转化生长因子β1+血管内皮细胞生长因子诱导组。采用RT-PCR和免疫细胞化学方法证实诱导的细胞是否为内皮细胞。 结果:①在存在MEF饲养层并加LIF时,体外支持ES细胞的生长扩增,能维持ES细胞迅速生长而未见明显的分化。ES细胞特点:在MEF饲养层上形成的ES细胞克隆,结构致密,似鸟巢状。②3组中拟胚体贴壁后第2天,胚体均略摊开,周围有上皮样细胞出现,第3 ,4天有许多卵石样细胞产生,至第6天开始出现由卵石样细胞构成的管状结构,诱导时间约2周。转化生长因子β1+血管内皮细胞生长因子诱导组中产生的管样结构的拟胚体数较转化生长因子β1诱导组、血管内皮细胞生长因子诱导组多。三组均数分别为44.67±3.88、28.17±6.08和33.00±2.68。③3组中诱导分化的卵石样细胞形态渐呈梭形, RT-PCR检测可有特异性的扩增条带出现,与DNAmark相比较,条带位置相符。扩增的细胞免疫组织化学染色,Ⅷ因子抗体反应显示阳性。 结论:1、证实了在MEF饲养层上可大量扩增ES细胞并保持其未分化状态,为胚胎干细胞的后期的应用研究奠定了良好的基础。 2、证实了转化生长因子β1与血管内皮细胞生长因子在体外培养体系中均能诱导胚胎干细胞为内皮细胞。 3转化生长因子β1与血管内皮细胞生长因子两者合用有可能提高诱导效率。