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人骨髓间充质干细胞向胆碱能神经元样细胞定向分化的实验研究

项正兵  
【摘要】: 目的探讨人骨髓间充质干细胞(BMMSCs)的体外分离、纯化、扩增和向胆碱能神经元样细胞的定向分化潜能,以期为BMMSCs的神经移植提供理论依据。 方法应用密度梯度离心法体外分离出BMMSCs,在含10%FBS的DMEM/F12培养基(完全培养基)扩增和传代,用流式细胞仪检测BMMSCs的表面标志。利用扩增后的第二代BMMSCs进行诱导分化,分为实验组和对照组。实验组的细胞先用含40mg/L WHI-P131的完全培养基预处理48小时后,在含10ng/ml重组人碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的完全培养基中预诱导24小时,最后以含1μmol/L全反式维甲酸(ATRA)和10ng/ml音速波状蛋白(Shh)的完全培养基诱导5小时;对照组不加任何诱导剂。诱导过程中在相差显微镜下观察细胞形态变化,然后进行神经元特异烯醇化酶(NSE)、神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和乙酰胆碱转移酶(ChAT)等神经细胞特异性标志的免疫细胞化学染色,并分别计算阳性细胞百分率。 结果分离扩增后的BMMSCs强表达CD29;较强表达CD44、CD166和CD105;不表达CD45、CD34和HLA-DR。实验组BMMSCs经诱导后均能分化为具有典型神经元形态的细胞,并表达NSE(61.00±3.63)%、GFAP(14.42±2.74)%;且相当部分神经元样细胞表达ChAT(9.92±1.29)%。对照组BMMSCs细胞形态无明显变化,且上述特异性标志物表达均为阴性。 结论BMMSCs可跨胚层分化为神经元样细胞和胆碱能神经元样细胞。


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