骨髓间充质干细胞与珊瑚羟基磷灰石复合自体肌肉内移植成骨的实验研究

【摘要】： 目的 探讨兔骨髓间充质干细胞(MSCs)体外分离、培养、扩增和鉴定的方法体系;实验观察珊瑚羟基磷灰石(CHA)复合兔MSCs的生物相容性及诱导成骨能力,并评价其构建组织工程骨的可行性及临床应用价值。 方法 1兔骨髓间充质干细胞(MSCs)体外分离、培养、扩增和鉴定。 穿刺抽取兔髂骨骨髓,用密度梯度离心法和贴壁培养法相结合,分离兔骨髓间充质干细胞,进行体外培养扩增,绘制其生长曲线,计算倍增时间,测定细胞贴壁率,用倒置显微镜观察细胞的生物学性状。通过免疫荧光组织化学鉴定细胞,了解其部分表型特点。行统计学分析,假定P0.05有统计学意义。 2兔MSCs复合CHA自体肌肉内异位成骨能力的实验研究。 取生长良好的第三代细胞,将其诱导转化成为成骨细胞,接种于盘状CHA上,自体移植于兔背部肌肉内,同时植入单纯的CHA作为对照。植入4、8周后取材,形态学观察(光学显微镜)其新骨形成情况。 结果 1分离培养的细胞贴壁生长,呈梭形,细胞增殖能力强,原代细胞呈集落生长,12-15天达到融合,传代后增殖速度加快,平均倍增时间为34h,随传代次数的增加细胞的增殖能力有所下降,1、3、5代细胞接种12h后贴壁率在90%以上。骨髓MSCs均一表达CD44,而不表达CD34。 2植入兔体内的成骨细胞/CHA复合物,在不同的时间段,都观察有新骨形成。阴性对照组未发现骨组织形成。 结论 1密度梯度离心与贴壁培养相结合,可有效分离和扩增骨髓MSCs;分离培养的骨髓MSCs生长稳定,增殖力强,可选用前5代传代细胞作为骨组织工程的种子细胞;细胞表面标志CD34阴性、CD44阳性可作为鉴定骨髓间充质干细胞(MSCs)的一种方法。 2成骨细胞/CHA复合物具有异位成骨作用,显示出良好的应用前景;CHA具有良好的生物兼容性和多孔网状结构,可以作为支架材料用于构建组织工程骨。