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中药甘松挥发油对大鼠心室肌细胞膜钠通道的影响

杨涛  
【摘要】: 目的:观察不同浓度甘松挥发油对大鼠心室肌细胞膜钠通道电流(I_(Na))的影响,以及甘松挥发油对I_(Na)电流-电压(I-V)曲线、激活曲线和失活曲线的影响,探讨甘松挥发油在离子通道水平抗心律失常的作用机制。 方法: 1.用急性酶解法分离大鼠心室肌细胞。以肝素抗凝,戊巴比妥钠麻醉大鼠,取大鼠心脏悬挂与Langendorff灌流仪行逆行灌流,先以无钙台氏液灌流心脏约5分钟,再以50微摩尔/升(μmol/L)低钙酶液灌流心脏,待心脏质地明显松软,则停止酶液消化,冲洗灌流系统及心脏中残留酶液,将心室肌组织块置于盛有KB液的烧杯中充分剪碎、轻轻吹打、过滤后置于KB液中室温下孵育1~2小时。 2.应用全细胞膜片钳记录技术,保持细胞钳制电位(holding potential,HP)在-90mV,选取纹理清晰、杆状和大小适中的细胞在室温下进行实验,以电阻为1.0~3.0MΩ的玻璃微电极封接大鼠心室肌细胞,待封接电阻至吉欧(GΩ)水平破膜,补偿串联电阻和细胞膜电容(Cm),记录不同浓度的甘松挥发油对I_(Na)的影响。 结果: 1.分别以浓度为1、3、5、10、100μg/g甘松挥发油作用大鼠心室肌细胞钠通道电流,其抑制率分别为8.0±2.9%、20.9±3.5%、53.9±7.8%、74.9±3.4%、94.7±3.6%(每个浓度n=5,P0.05),采用I=ImaxCn/(Cn+EC_(50)n)方程进行拟合,半数有效浓度EC_(50)值为4.74±0.59,斜率因子为2.08±0.50; 2.以浓度为5μg/g甘松挥发油灌流液作用大鼠心室肌细胞进行对照研究,保持细胞HP为-90mV,给药前I_(Na)的激活电位为-70mV,电流密度在膜电位为-30mV时达最大值,其值为(-44.7±10.3)pA/pF,翻转电位为20mV;在浓度为5μg/g甘松挥发油灌流法给药后,I_(Na)的激活电位仍为-70mV,电流密度在膜电位在-30mV时达最大值,值为(-20.3±4.6)pA/pF,翻转电位为20mV。给药前后I_(Na)激活电位、峰电位和翻转电位无改变,峰值电流密度变化有显著的统计学意义(n=5,P0.05); 3.以浓度为5μg/g甘松挥发油作用钠通道,使激活曲线半数激活电压(V1/2)从(-48.66±0.76)mV右移至(-43.94±1.02)mV(n=5,P0.05); 4.以浓度为5μg/g甘松挥发油作用I_(Na),使失活曲线半数失活电压(V_(1/2))从(-100.48±0.71)mV左移至(-109.82±0.86)mV (n=5,P0.05)。 结论: 1.甘松挥发油可通过浓度依赖性地抑制大鼠心肌细胞膜I_(Na);在不同膜电位水平对钠通道电流均具有抑制作用; 2.甘松挥发油使I_(Na)的I-V曲线明显上移,不改变I_(Na)的激活电位、峰值电位和反转电位; 3.使钠通道激活曲线右移; 4.使钠通道失活曲线左移。


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