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多功能植物小分子肽的研究

郑明  
【摘要】: 本研究以植物蛋白(大豆蛋白和花生蛋白)为原料,采用微射流均质技术结合复合酶酶解技术制备功能性小分子肽,研究了微射流和复合蛋白酶酶解的最佳工艺条件,并对小分子肽的结构和功能性质进行表征和分析,初探了多功能性小分子肽的构效关系。 1、在单因素实验的基础上,采用Plackett-Burman设计,以酸溶蛋白肽的得率为响应值,对影响植物蛋白水解的因子进行筛选。本实验选取了10个相关因子进行筛选,试验结果表明底物蛋白的浓度、第一次酶解时的pH和温度这三个为主要影响因子。 2、在Plackett-Burman设计的基础上,采用响应曲面法(Response Surface Methodology, RSM)分析,以酸溶蛋白肽的得率为响应值,对底物蛋白的浓度、第一次酶解时的pH和温度3个关键因素的最佳水平进行了优化。经求解二次多项回归方程得知,底物蛋白的浓度为8.90%、第一次酶解时溶液的pH为8.04、温度为57.80℃时,其酸溶蛋白肽的得率最高为88.11%,相关系数为0.9516,所建模型极其显著(p0.0008)。 3、采用Sephadex G-25凝胶色谱对酶解后的溶液进行分离纯化,得到小分子肽。采用HPLC法对其相对分子量进行测定,结果显示,小分子肽主要集中在相对分子量为400Da左右的范围,该组分的小分子肽具有清除DPPH功能和降胆固醇功能,其DPPH的清除率为44.78%,胆固醇胶束的抑制率为73.2%。 4、采用HPLC-MS法对M3、M4的结构进行了初步研究,结果表明,M3含有SRQ或SRK、DHI或DHL;而M4中基本上全部是氨基酸,从质谱图中找到了两种可能的氨基酸,它们是丙氨酸和异亮氨酸或亮氨酸。 5、对于功能性植物小分子肽的产品开发,现今只开发了功能性植物小分子肽口服液。以植物蛋白水解液为原料制备小分子肽口服液,各项指标均符合国家标准,且口感好,易于被人体吸收,将是新一代的保健产品。


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