诱导人骨髓间充质干细胞向运动神经元分化的研究
【摘要】：
目的探讨人骨髓间充质干细胞(human bone marrow mesenchymal stem cells ,hMSCs)在体外诱导向运动神经元分化的潜能。
方法取正常人新鲜骨髓,用密度梯度离心法分离hMSCs,在含有10%胎牛血清(FBS)的DMEM/ F12培养基扩增和培养,通过细胞传代纯化hMSCs。利用传代后的第1代hMSCs分为诱导组和对照组,诱导组的细胞在完全培养基中加入终浓度为10μg/L碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)预处理24小时后,用0.5μg/ml维甲酸(RA)和200 ng/mL音猬因子(Shh)联合诱导10天。对照组不加上述诱导剂。光镜下观察其分化过程中hMSCs的形态变化;免疫细胞化学检测诱导前后细胞是否表达神经干细胞特异性标志蛋白神经巢蛋白(nestin)、神经元细胞特异性烯醇化酶(NSE),并计算阳性细胞所占比率;用流式细胞仪检测是否产生运动神经元标志物HB9及运动神经元在总的细胞数中所占比率,并用流式软件分析结果。
结果诱导组hMSCs经诱导后能分化为具有典型神经元形态的细胞,部分细胞表达nestin和NSE,表达率分别达到(25.00±4.47)%、(51.52±4.40)%;流式检测诱导后运动神经元特异性标志蛋白HB9表达,表达率达到(50.04±5.25) %。对照组细胞形态无改变,无nestin和NSE表达;HB9表达小于5%,两组差异有显著性(p0.05)。
结论hMSCs在体外条件下能诱导分化为运动神经元样细胞。
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