体外壳聚糖—明胶—生长因子缓释支架对骨髓间充质细胞增殖的影响

【摘要】： 目的：制备具有缓释功能的壳聚糖—明胶—碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)—肝细胞生长因子(HGF)三维大孔支架,探讨两种生长因子在体外对骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖的协同作用。 方法：采用冷冻干燥法,将不同比例的壳聚糖、明胶、bFGF和HGF依次混合,通过冷冻、干燥,使其成为具有一定孔径的三维缓释支架。取SD大鼠乳鼠股骨和胫骨骨髓,分离、培养骨髓间充质干细胞。取生长状态良好的第三代BMSCs,将其接种于96孔板后,加入支架混合培养,5d后进行MTT细胞增殖测定。实验过程中对动物的处理符合伦理学标准。 结果：在与含1μg/mL的bFGF支架混合培养,以及与同时含1μg/mL的bFGF、1μg/mL的HGF支架混合培养后,BMSCs明显增殖(P0.05),但这二组间无差别(P0.05)。而与含0.1μg/mL的bFGF支架、0.01μg/mL的bFGF支架、1μg/mL的HGF支架混合后,细胞增殖无统计学差异(P0.05)。 结论：梯度密度离心法结合贴壁筛选法能获得高纯度高活性BMSCs;壳聚糖—明胶可作为生长因子缓释支架材料；bFGF具有促进BMSCs增殖的作用,促进作用的大小与加入bFGF的量有关；HGF对BMSCs不具有增殖作用；bFGF和HGF在体外促进BMSCs增殖上不具有协同性。