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肾缺血再灌注损伤后miR-210及其靶基因的变化

邓君  
【摘要】: 目的和意义: 缺血性肾损伤是肾脏移植和肾脏手术等过程中面临的问题。尽快恢复缺血区的血供是修复肾缺血损伤的关键,积极探讨缺血性肾损伤后血管新生的分子机制也对于修复缺血性肾损伤具有重要意义。研究发现,VEGF信号通路对血管的发生发展,包括细胞增殖、迁移、分化、血管生成等多个方面有重要调控功能。VEGF通路可能是介导肾缺血后血管新生的主要信号通路。近年来,研究报道miRNA可调控组织血管新生,缺血后,组织中一系列的miRNA表达发生显著改变。研究还提示miRNA210这一作用可能是通过调控其靶标基因参与血管生成的信号通路如VEGF信号通路,影响血管生成。 本研究通过制作肾缺血/再灌注(Ischemia/Reperfusion,I/R)小鼠模型,观察肾缺血组织中miRNA210的动态变化,并探讨其靶基因Ephrin-A3在肾缺血再灌注损伤中的作用,以期为缺血性肾损伤提供新的思路。 研究内容和方法: 1、制作缺血性肾损伤模型,采用微型动脉夹夹闭小鼠双侧肾蒂制备急性缺血/再灌注肾损伤模型。于I/R后4h、24h、48h、72h、7d分批处死各组小鼠,取肾组织标本待检。 2、采用酶标免疫组织化学染色和RT- PCR方法观察Ephrin-A3分子蛋白和基因表达水平的变化。 3、采用实时荧光定量PCR方法,观察组织缺血诱导的miRNA210的动态变化。 结果: 1、缺血性肾损伤后Ephrin-A3分子蛋白和基因表达水平的动态变化: (1)RT-PCR结果显示,肾I/R损伤4h后,缺血组织Ephrin-A3mRNA表达水平显著上调(P0.01)。 (2)酶标免疫组织化学染色结果显示,肾I/R损伤4h组较假手术组Ephrin-A3蛋白阳性细胞数显著减少(P 0.01),提示I/R损伤后Ephrin-A3蛋白的表达水平下降。 2、缺血性肾损伤后miR-210的表达变化:肾脏I/R4h后,miR-210的表达明显上调,其上调倍数分别为1.96+ 0.52(P 0.05)。 结论: 实验结果表明,肾缺血后miRNA210的表达变化显著上调,且伴随着Ephrin-A3蛋白水平下调和基因表达水平上调。研究结果提示,肾缺血后miRNA210通过靶向基因Ephrin-A3参与肾缺血后血管再生的调控过程。


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