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大鼠肝/肠联合移植的实验研究

逯宁  
【摘要】: 为研究肝肠联合脏器移植的免疫反应规律,探讨手术技术的可行性和两个脏器间的彼此作用。我们采用Wistar→SD种系组合,利用显微外科技术构建大鼠肝/小肠联合移植模型,摸索模型制作的技术要点,观察术后受体及移植物生存情况,并与单独肝移植和小肠移植模型进行比较。分别在术后5、7、14天获取移植物标本,观察分析移植物浸润细胞组织学改变以及排斥反应强度,用TUNEL法检测移植物细胞凋亡,利用半定量PCR方法分析移植物穿孔素/颗粒酶B的表达,通过免疫组织化学染色检测移植物Fas/FasL表达,并观察雷公藤多甙对肝肠联合移植后免疫反应的影响。 在造模过程中共进行大鼠肝肠联合移植手术103次,技术稳定后手术成功率达到63.15%。其中70%以上受体获得长期存活(28天),同期所行肝移植受体全部获得长期存活,小肠移植受体则在20天内死于排斥反应;组织学检查显示,术后5天移植小肠出现排斥反应,术后7天,单独小肠移植组移植物出现中-重度排斥反应,联合移植组移植小肠排斥较术后5天加重,但比单独小肠移植轻,至术后14天,肝肠联合移植组移植小肠病理改变开始消失;术后7天移植肝脏汇管区有炎胞浸润,14天加重,肝肠联合移植组和单独肝移植组之间无明显差异;术后移植肝和小肠都出现细胞凋亡,肝肠联合移植组移植小肠凋亡细胞较单独小肠移植组明显减少;单独小肠移植组移植小肠颗粒酶/穿孔素表达较肝肠联合移植组高:联合移植组移植小肠FasL表达较单独小肠移植组高。在移植肝脏,术后14天FasL表达较术后7天高,而联合移植组与单独肝移植组无明显差别;给以雷公藤多甙可使术后7天联合移植组移植小肠浸润细胞减少,术后14天移植肝脏浸润细胞也减少。 研究结论:(1)大鼠肝肠联合移植模型是一个比较稳定的模型,其制作成功有赖于精巧的显微外科操作和细致的围术期处理;(2)大鼠肝/小肠联合整块移植手术与临床术式相近,可以满足临床前研究的需要;(3)肝/小肠联合整块移植可保证两个移植物的同源性,且移植物血运符合生理要求,是研究肝肠联合移植后免疫反应规律的理想模型;(4)采用Wistar→SD大鼠种系组合行肝/小肠联合移植,移植物可被自然接受;(5)肝肠联合移植后免疫耐受的 天津医科大学博士研究主学位论文 中文摘要 形成涉及淋巴系统活化,是一种主动调节过程:(6)移植后实质细胞凋亡与排 斥反应强度紧密相关;(7)穿孔素顺粒酶作为CTL活化的重要标志可以敏感地 反映m+CTL的活性,与排斥反应的强度密切相关:侣)在耐受形成过程中, 移植物Fas卜表达明显上调,提示机体可能通过这一机制调节免疫反应仰雷公 藤多贰抑制淋巴细胞活化,减轻排斥反应,有利于耐受诱导状态。


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