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子宫内膜癌抗雌激素治疗和VEGF调控因素的基础研究

罗营  
【摘要】: 目的 检测新一代的抗雌激素药物EM65-2对子宫内膜癌细胞系RL95-2在体内和体外的作用,同时探讨在体内和体外条件下VEGF调节因素。 材料和方法 RL95-2对雌激素和抗雌激素药物的反应分体内和体外两部分进行,体内实验过程中我们首先建立了RL95-2细胞在切除卵巢后的Balb/c纯系裸鼠皮下的移植瘤模型,然后通过皮下分别给予雌酮、苯甲酸雌二醇、EM65-2或安慰剂,通过定期测量裸鼠皮下移植瘤的径线所计算的移植瘤的体积、试验结束时移植瘤的重量、子宫的重量来检测RL95-2细胞对雌激素和抗雌激素药物EM65-2的反应。体外试验过程中主要通过MTT法、平板集落生成试验和微孔碱性磷酸酶测定法检测RL95-2细胞对雌激素和抗雌激素药物的反应。 VEGF的调控分也分为体内和体外两部分进行,体内部分利用前面实验中获得的不同条件下的裸鼠的皮下移植瘤和小鼠的子宫,通过免疫组化方法检测不同雌激素和抗雌激素的条件下的VEGF的表达情况:体外部分,首先建立RL95-2细胞的无血清培养方法,然后建立无雌激素正常pH、无雌激素低pH的培养液和雌二醇浓度为10nM的正常pH等三种条件培养液,于培养的不同时间分离上清液,通过Elisa法检测上清中VEGF的变化。实验期间通过pH计监测条件培养液的酸碱度变化,并与试验中的测得的VEGF的结果进行分析。 结果 1、将裸小鼠随机分为不切除卵巢(NOVX)、切除卵巢(OVX)和切除卵巢后给予雌二醇(OVXE2)等三组,三组成瘤率100%;各组肿瘤体积大小不同,OVXE2组NOVX组OVX组,差异显著(p0.05);三组瘤重不同,差异显著(p0.05)。 2、将36只裸鼠去卵巢后随机分成A组:对照组;B组:5M165-2治疗组;C组:给予雌酮;D组:雌酮和EM65-2组;E组:苯甲酸雌二醇组;F组:苯甲酸雌二醇和EM65-2组。A组皮下移植瘤缓慢地进行性生长;应用雌酮和苯甲酸雌二醇组肿瘤生长较快,且明显大于对照组;B组的肿瘤生长速度短期内超过A组,而且于两周内具有显著性差异;D组和F组的肿瘤体积较C组和E组无显著性差异。子宫重量A组最小,B组其次,C、D和F组间无显著性差异,D组最大,D、C和F组间无显著性差异,其余各组间具有显著性差异。 3、在不同浓度的雌二醇的体外培养的条件下通过MTT法检测的活细胞数目,细胞在接种后的前三天细胞数目变化不大,第四天开始细胞数目迅速增加,第七天开始增加速度下降;第八天开始加入雌二醇组活细胞数目仍在增加,而无雌二醇组活细胞数目开始下降;前五天各组的活细胞数目无显著性差异:第六天至第八天出现显著性差异;q检验的结果显示雌二醇10nM组最高,雌二醇10~3nM和10~(-1)nM次之,此三组间无显著性差异;其余两组活细胞数目低于前三组,此两组组间无显著性差异;前三组与后两组间有显著性差异。无雌激素条件培养液 天津医科大学妇产科学博士论文(中文摘要) — — MTT法所测得值各组间无显著性差异,也就是说各组不同时间活细胞 数量无显著性差异。雌二醇浓度 10nM的培养体系中加入最终浓度为 10’、10、10”’、10“3和 ohM的 EM65.2或他莫昔芬,MTT法所测得值 各组间无显著性差异,也就是说各组不同时间活细胞数量无显著性差 异。 4、在*、10、10”’、10“‘和 ohM等不同浓度的雌二醇的条件培养液,ohM 和 10nM雌二醇的培养体系中分别加入 10’、10、10”’、10“‘和 onM的 EM65-2或他莫昔芬的条件培养液中进行平板集落生成试验,上述每种 条件培养液中所得集落数 94 05之间,经 F检验后每组间均无显著性 差异。 5、在观察期间内各组条件培养液中的VEGF的浓度除在24小时较8小时 稍有下降外进行性增高;VEGF 的最低浓度为2 小时的对照组为 250pg/m!,最高为第72 .J\时的低pH的条件培养液,浓度达1725pg/ml; F检验的结果显示2小时、8小时、24小时和72小时三种条件培养液 中VEGF浓度具有显著性差异;48小时的培养液中的VEGF浓度三组 间无显著性差异;通过q检验对2小时、8小时、24小时和 72小时四 个不同时间段的三种条件培养液的VEGF浓度进行两两比较,结果显 示;2小时组三种培养液间每两种间都具有显著性差异;8小组时C液 与A和B液间具有显著性差异,A和B液间无显著性差异,A和B间 比较p-0.642;24小组时C液与 A和 B液间具有显著性差异,A和 B 液间无显著性差异,A和B间比较p=0.289;72小组时C液与A和B 液间具有显著性差异八和 B液间无显著性差异八和 B间比较p-0二07


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