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大鼠原位小肠移植术后早期肠运动功能障碍的机理研究

翟世伟  
【摘要】:目的:为探讨小肠移植术后早期移植肠运动功能障碍的机理,明确COX-2在大鼠早期移植肠功能障碍中的作用和机制,了解早期移植肠运动功能障碍的表现,同时寻求有效的治疗方法。 方法:本课题利用显微外科技术,建立了大鼠原位全小肠移植模型。为了避免免疫排斥和抗排异药物对移植物的复杂影响,采用同系大鼠(BN→BN)间移植。在稳定的小肠移植模型基础上,采用了RT-PCR的方法观察供肠及术后早期不同时段—术后0h、术后12h、术后24h和术后48h移植肠肌层中炎症反应的关键调控因子—COX-2 mRNA的表达情况。并采用LAB-SA免疫组化染色法了解COX-2蛋白的表达及其在肠肌层中的细胞定位,本课题也首次使用透射电子显微镜观察移植肠肌层的变化,以期了解早期移植肠运动功能障碍的机理。同时结合对正常小肠和48h移植肠肌条机械活动的体外试验,在体小肠传输实验和移植肠运动功能的放射学评价,明确早期移植肠运动功能障碍存在的特征。最后通过小肠传输实验观察了具有COX-2选择性抑制作用的中药青藤碱对早期移植肠运动功能障碍的疗效。 结果: 1.通过学习,熟练掌握大鼠原位全小肠移植技术,建立稳定的小肠移植模型。在正式实验阶段,供体手术时间平均为41.5±1.5min。受体手术时间平均为88.2±10.5min,其中吻合静脉时间平均为22.2±3.8min,吻合动脉平均时间为16.0±2.8min,吻合肠管(两个吻合口)平均时间为28±4.4min。正式实验阶段60例大鼠原位小肠移植,手术成功率86.7%。静脉血栓、腹腔出血和腹腔感染仍是大鼠原位小肠移植模型的主要死亡原因。大体病理观察术后24h可见移植肠轻度扩张,周径增粗,肠壁水肿,外观呈玫瑰色,48h上述表现更为明 天津医科大学博士学位论文 中文摘要 显。常规病理HE染色见术后12h小肠粘膜绒毛肿胀明显,术后24h小肠粘膜大 量剥落。术后48h小肠粘膜再生明显,术后96h小肠粘膜的绒毛高度等己接近 正常。所有手术成功的大鼠均在术后3h内清醒,6h左右恢复进水,24h内恢复 进食。术后72h大鼠体重平均减少5%左右。 2.RT-PCR法检测小肠移植手术中供肠及术后不同时段小肠肌层COX一2 mRNA的表达结果显示:COX一2 mRNA在正常情况下只有微量表达;供肠组COX一2 mRNA的表达量迅速上调:移植术后0h,COX一2 mRNA的表达进一步上调,在术后 24h COX一2基因的表达达到高峰,然后迅速下调。免疫组化对小肠COX一2蛋白的 检测表明:正常对照组小肠肌层中寄居有巨噬细胞,COX一2蛋白无表达或仅有微 弱表达;术后24h肠肌层多个单核一巨噬细胞的胞浆里有COX一2蛋白的强阳性表 达,正常小肠和术后24h肠肌层COX一2蛋白的表达存在着显著差异。本实验也 首次发现粘膜层也存在着COX龙蛋白的表达,表达定位在粘膜上皮细胞和粘膜 固有层白细胞。小肠平滑肌细胞本身并无COX一2蛋白的表达。透射电镜观察大 鼠小肠移植术后早期各阶段小肠肌层的超微形态改变发现:术后0h肌层巨噬细 胞活化,炎症细胞浸润,免疫应答反应存在,同时见到小肠平滑肌细胞损害征 象。术后24h上述表现更为明显,平滑肌细胞的损伤程度也较0h组更为严重。 3.小肠环行肌条的体外收缩实验表明:小肠移植术后48h移植肠肌条的自 发性收缩力与正常小肠肌条比明显降低,48h移植肠肌条对乙酞胆碱刺激的反应 明显性也较正常小肠减低。小肠传输实验显示:移植术后48h小肠的传输功能 明显延迟。灌胃钡剂造影的放射学观察也直观地显示:小肠移植术后移植肠传 输功能明显降低,胃排空延迟。 4.小肠传输实验观察具有COX一2选择性抑制作用的中药青藤碱对移植肠运 动功能障碍的影响的实验表明:小肠移植手术中供受体同时给青藤碱可明显改 善小肠传输功能。 结论: 小肠移植手术造成术后早期移植肠肌层COX一2基因和蛋白的渐进性高表 天津医科大学博士学位论文 中文摘要 达,表现为肠肌层强烈的分子和细胞的炎症反应,从而直接或间接地影响了小 肠的运动功能。具有COX一选择性抑制作用的中药青藤碱供受体同时给药对改 善移植肠运动功能具有显著作用。


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