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活血化瘀药物对人胰腺癌生长、侵袭和转移的实验研究

汝涛  
【摘要】:胰腺癌是预后最差的消化道肿瘤,五年生存率小于5%。影响预后的主要原因是肿瘤的侵袭和转移。近年来的研究表明:恶性肿瘤的侵袭和转移是一个多因素、多步骤、多阶段的复杂过程。其中肿瘤细胞粘附性的改变在其侵袭和转移过程中起着重要的作用。 活血化瘀是传统医学治疗恶性肿瘤的重要手段。中医学认为瘀血内阻是发生恶性肿瘤的重要病机,有关临床与实验研究也证实恶性肿瘤的形成和转移与肿瘤患者存在的血瘀证有直接关系,因此活血化瘀治疗肿瘤符合中医辨证论治的治疗原则。川芎是典型的活血化瘀药。现代医学研究发现川芎通过直接抑制肿瘤细胞、化疗增效与减毒作用达到抗肿瘤效应;通过抗凝血与抗血小板集聚而发挥抗肿瘤转移作用。但是对肿瘤细胞侵袭和转移尤其是肿瘤细胞黏附性的研究不多,对粘附分子及血管生成的作用还有分歧。因此我们采用体外和体内实验的方法系统地研究了川芎对胰腺癌生长、侵袭和转移的影响。 为了更好地模拟胰腺癌在体内的生长、侵袭、转移特性,我们建立了裸鼠胰腺癌原位移植模型。在体外细胞学实验的基础上,利用动物模型研究了川芎对胰腺癌移植模型体内生长、侵袭、转移的影响。为进一步探讨活血化瘀药物治疗恶性肿瘤提供了实验资料。 天津医科大学博士学位研究生论文 第一部分 川芍对胰腺癌HS7“T细胞体外增殖、粘附影响的实验研究 目的:探讨川芍对胰腺癌HS 766T细胞体外增殖、粘附的影响:确定川芍干 预体内实验的剂量。 方法:采用细胞培养的方法建立稳定传代的胰腺癌HS 766T细胞系,体外培 养人脐带静脉内皮细胞。采用MTT法检测川芍对HS 766T细胞增殖的作用;采用 PI染色、流式细胞分析技术测定川芍作用后HS 766T细胞周期的改变及细胞凋 亡。采用CCK一8法检测川芍对HS 766T细胞与基底膜成分层粘连蛋白粘附作用的 影响;检测川芍对 HS 766T细胞与内皮细胞粘附作用的影响。 结果:川芍可以抑制胰腺癌HS 766T细胞的体外增殖,并呈时间剂量依赖关 系。川芍可以通过阻滞HS 766T细胞G。/G:期抑制细胞增殖,通过增加合成期细 胞百分比促进细胞凋亡的产生。川芍可以抑制HS 766T细胞的体外侵袭,抑制 HS 766T细胞同层粘连蛋白及血管内皮细胞的粘附作用,并呈时间剂量依赖关系。 结论:川芍在体外可以抑制胰腺癌HS 766T的增殖、侵袭和粘附:川芍动物 实验的剂量为0.59/m1。 第二部分 川芍对胰腺癌HS 766T裸鼠原位移植模型 侵袭转移影响的实验研究 目的:探讨川芍对胰腺癌体内生长、侵袭和转移的生物学行为的影响及其机 方法:建立胰腺癌HS 766T裸鼠胰腺原位移植模型,通过川芍灌胃治疗干预 一2一 天津医科大学博士学位研究生论文 动物模型移植瘤的生物学行为,观察模型动物的体重、生存率;观察移植瘤的生 长、侵袭和转移情况;通过流式细胞分析技术测定移植瘤的细胞周期及细胞凋亡; 采用免疫组化方法半定量检测移植瘤E一CAD、MMP一9、P一SELECTIN、vEGF的蛋白 表达。 结果:胰腺癌HS 766T裸鼠原位移植模型可以模拟胰腺癌体内的生长、侵袭 和转移等生物学行为。川芍可以抑制胰腺癌造成的动物体重下降,提高模型动物 的9周生存率。川芍可以抑制胰腺移植瘤的生长、侵袭、转移。川芍可以增加胰 腺移植瘤细胞的凋亡。川芍可以增加胰腺癌E一CAD的表达;川芍可以抑制胰腺癌 MMP一9的表达;川芍可以抑制胰腺癌P一SELECTIN的表达;川芍可以抑制胰腺癌 VEGF的表达。 结论:川芍可以抑制胰腺癌体内的生长、侵袭、转移。通过改变细胞周期, 增加细胞凋亡,抑制新生血管生成抑制胰腺癌的体内生长;通过降低基质金属蛋 白酶的表达抑制胰腺癌的侵袭;通过影响胰腺癌的勃附作用抑制胰腺癌的转移。


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