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来源于脐血与骨髓中间充质干细胞和造血干细胞的比较

程瑞芳  
【摘要】:目的: 观察体外分离培养的脐血与骨髓中间充质干细胞和造血干细胞扩增及向成骨细胞诱导的特性,探讨脐血与骨髓干细胞的差异和造血干细胞向成骨细胞的分化。 方法: 用密度梯度离心法体外分离、纯化和培养脐血与骨髓中单个核细胞(MNC)和CD34+细胞,加入SCF和TPO促脐血CD34+细胞扩增。在细胞贴壁后,加入地塞米松、β-甘油磷酸和抗坏血酸,向成骨细胞定向诱导。用瑞氏染色、碱性磷酸酶(ALP)染色、骨钙素和Ⅰ型胶原免疫组化染色、矿化结节染色和流式细胞仪分型作为检测手段,观察脐血与骨髓中MNC和CD34+细胞的形态、生长特性、诱导分化和表面标志的不同。 结果: 1、分离18份脐血,只有12份获得了贴壁细胞。MNC体外培养可以获得贴壁细胞,但形态不均一,主要为破骨样细胞和纤维样细胞,传代不超过二次。向成骨细胞诱导后细胞形态变化不大,ALP增多,骨钙素和Ⅰ型胶原染色阳性,矿化结节染色显示无钙沉积。脐血CD34+细胞经SCF和TPO刺激,扩增潜能较高,体外扩增后可以获得少量贴壁细胞,传代后不再贴壁生长。 2、分离12份骨髓,均获得了贴壁细胞。MNC和CD34+细胞体外培养可以获得形态均一的纤维样贴壁细胞,是间充质干细胞(MSC),无需添加细胞因子即可扩增,可多次传代。贴壁细胞向成骨细胞诱导后细胞变大,ALP明显增多,分泌骨钙素和Ⅰ型胶原,有钙沉积。 结论: 1、骨髓CD34+细胞低表达Stro-1,其中含有成骨细胞的前体细胞:脐血 天津医科大学硕士研究生论文 CD34+细胞高表达Str。一1,在体外只能能获得极少的贴壁细胞,提示骨髓造 血细胞与脐血造血细胞(CD34+细胞)的性质不同。 2、脐血中是否含有间充质样干细胞仍然是一个有争议的问题,我们的实 验结果显示,脐血不能获得典型的间充质样干细胞。 3、脐血MNC体外培养后获得贴壁细胞,虽然从形态上呈破骨细胞样, 但向成骨诱导后可以表达成骨细胞标志物,如ALP、Coll和OCN,提示这 些细胞在功能上至少己经具备了某些成骨细胞的性质。


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