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腺病毒介导的野生型P53基因(Ad-P53)转染人肺腺癌细胞系放射增敏作用的体内实验研究

庞得全  
【摘要】:目的:本研究筛选了P53基因状态不同的两种人肺腺癌细胞系A549及GLC-82,分别建立裸鼠人肺腺癌移植瘤模型,使用E1复制缺陷型重组腺病毒介导的野生型P53基因瘤内注射治疗,观察其放射增敏作用并探讨其机制,同时比较不同P53基因状态对治疗的影响,为临床开展基因放射治疗提供实验依据。 方法:本实验共分二部分。第一部分对携带外源性野生型P53基因cDNA及绿色荧光蛋白(GFP)基因的复制缺陷型重组腺病毒的扩增,达到最佳转染滴度。第二部分对人肺腺癌细胞系A549及GLC-82进行复苏和增殖,达到最佳致瘤细胞数,分别建立裸鼠人肺腺癌A549及GLC-82移植瘤模型,并各自分为空白对照组、E1复制缺陷型重组腺病毒对照组、Ad-P53治疗组、单纯放射治疗组及Ad-P53+放射治疗组5组,共10组,每组4只裸鼠。分组处理后,观察各组肿瘤受抑制及生长延迟,连续测量肿瘤体积并绘制肿瘤生长曲线,及治疗后肿瘤组织病理切片比较,并作组间比较。观察P53基因治疗的效果及其放射治疗增敏作用,探讨其机理;同时观察体内不同的P53基因状态对wtp53放射增敏作用的影响。应用SPSS10.0统计软件包对结果进行分析。 结果:第一部分对携带外源性野生型P53基因cDNA及绿色荧光蛋白(GFP)基因的复制缺陷型重组腺病毒的扩增,提取后空斑法测定病毒滴度为7.33×10~(10)pfu/ml,将所有病毒贮存于-70℃备用。第二部分对人肺腺癌细胞系A549及GLC-82进行复苏和增殖,以PBS液稀释制备成1×10~9/ml的细胞悬液,然后别建立裸鼠人肺腺癌A549及GLC-82移植瘤模型。分组处理后绘制肿瘤生长曲线并进行分析,显示Ad-P53治疗组、单纯放射治疗组及Ad-P53+放射治疗组对肿瘤均有抑制作用,而Ad-P53+放射治疗组作用最为明显,与前4组比较有显著性差异(P<0.05)。肿瘤组织病理切片HE染色,光学显微镜下观察,Ad-P53+放射治疗组出现大面积的变性和坏死,凋亡亦多见;空白对照组和E1复制缺陷型重组腺病毒对照组几乎没有坏死(除由于肿瘤过大引起缺血、缺氧营养缺乏导致的肿瘤中心坏死),肿瘤生长旺盛,核分裂像多见; Ad一P53治疗组和单纯放射治疗组亦有变性和坏死,但不如Ad一P53+放射治疗 组明显;Ad一P53治疗组凋亡较多,单纯放射治疗组较少。A549及GLC一82两 大组间差异不明显。 结论:研究结果表明腺病毒载体可有效的将外源wtp53基因转入人肺腺 癌细胞,wtp53可以抑制人肺腺癌细胞的恶性生长,Ad一wtp53瘤内注射结合 放疗可以提高人肺腺癌细胞的放射敏感性。其机制在于wtp53可使细胞周期 阻滞于G,期,抑制肿瘤增殖并促进放射诱导的凋亡,同时wtp53的放射增敏 作用并不依赖于细胞内源性p53基因的状态。


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