中药生肌液对骨髓间充质干细胞增殖和成骨活性影响的实验研究

【摘要】：因多种疾病引起的骨缺损在临床当中十分常见,但治疗困难。近年来组织工程学的创立和迅速发展,为骨组织修复提供了新的思路和方法。骨组织工程研究主要有三个方面:种子细胞,生长因子,支架材料。其中,骨髓间充质干细胞(MSCs)及其诱导因子是目前生命科学研究的重点。结合中药生肌膏能够治疗感染开放性骨折的临床经验,本试验尝试将生肌液作为MSCs的刺激因子进行研究。 目的:1 建立和完善MSCs分离和培养技术,最大限度的获得MSCs。2将中西医结合治疗感染开放骨折的特色中药应用于MSCs的增殖和分化,为骨组织工程研究找寻一种新的作用因素,从而进一步加深我们对中药药物作用的认识,探索中药在骨组织工程领域的新应用。 方法:1 取家兔胫骨骨髓,用密度梯度离心—贴壁筛选的方法,获取并培养鉴定MSCs。2 提取制备生肌液,将不同浓度的生肌液作为MSCs刺激因素,以不含生肌液的MEM培养液为空白对照,以含地塞米松(DEX)、β-甘油磷酸钠(β-GP)、维生素C(VitC)的MEM培养液为标准对照,用镜下观察、MTT检测的方法考察生肌液对MSCs增殖活性的影响。3 以成骨细胞为阳性对照,采用上述空白对照、标准对照,用免疫组织化学染色(胶原Ⅰ)、四环素标记和检测细胞合成物(碱性磷酸梅、骨钙素、乳酸脱氢酶)并计算其比值(碱性磷酸梅/乳酸脱氢酶、骨钙素/乳酸脱氢酶)的方法,考察MSCs在不同浓度的生肌液作用下的成骨活性。