三氧化二砷对类风湿性关节炎滑膜细胞凋亡影响的体外研究

【摘要】：目的:类风湿性关节炎(RA)、骨性关节炎(OA)、正常人(NC)滑膜细胞原代培养及研究三氧化二砷(arsenic trioxide,As_2O_3)对体外培养的人关节滑膜细胞凋亡的诱导作用,进而探讨As_2O_3在治疗类风湿性关节炎中的价值。 方法:酶消化法进行关节滑膜细胞原代培养,本实验采用3～10代人关节滑膜细胞;用光镜、电镜、HE染色及细胞免疫组化等方法对培养细胞进行型别鉴定;MTT法检测不同浓度As_2O_3对体外培养的9例RA及对照组的3例OA和3例NC滑膜细胞作用不同时间(24小时、48小时、72小时)后对其活力的影响,并用SPSS 11.0统计软件对结果进行统计学分析;用光镜、电镜及DNA凝胶电泳等方法检测As_2O_3诱导RA、OA及NC滑膜细胞凋亡的情况。 结果:1.光镜、电镜、HE染色及细胞免疫组化(Vimentin、CD14单抗)等方法证实体外培养细胞确实为关节滑膜细胞,包括:(1)巨噬细胞样细胞(Macrophagelike Cell,MCs/A型细胞);(2)成纤维细胞样细胞(Fibroblastlike Cell,FCs/B型细胞);(3)树突状细胞(Dendritic Cell,DCs/C型细胞)。 2.MTT法显示一定浓度As_2O_3作用一定时间能够抑制滑膜细胞活性,且其抑制作用呈时间剂量依赖性。 3.光镜、电镜下发现一定剂量的As_2O_3作用一定时间后滑膜细胞出现凋亡表现,如胞体皱缩、细胞变圆、细胞核染色质浓缩等;DNA凝胶电泳显示有凋亡Ladder出现。 结论:As_2O_3可以诱导RA滑膜细胞凋亡并且可能因此起到治疗作用,本实验可为临床筛选RA治疗用药及剂量提供帮助。